琼脂糖凝胶电泳 2.pptVIP

* DNA琼脂糖凝胶电泳 指导教师：龚 熹 生物基础实验中心 实验目的： 学习和掌握琼脂糖凝胶电泳的原理 和基本操作。 实验原理： 1.琼脂糖凝胶电泳是最常用的鉴定DNA的方法，它简便易行，只需少量DNA。 2.琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。 3.DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。DNA分子的迁移速率与其相对分子质量的对数成反比。 4.观察琼脂糖凝胶中DNA的最简便方法是利用荧光染料溴乙锭（EB）染色，EB在紫外灯照射下，发红色荧光。 实验器材： 移液器 水平电泳槽 一次性手套 微波炉 紫外检测仪 水平仪 tip 量筒 锥形瓶 实验器材： 实验试剂： 1.pH8.0 TAE缓冲液 2.凝胶上样缓冲液：0.2%溴酚蓝，50%蔗糖 3.琼脂糖 4.1mg/ml EB溶液 5.Marker 6.PCR扩增特异DNA片段 操作： 1.琼脂糖凝胶的制备 称取0.45g琼脂糖，放入锥形瓶中，加入30ml TAE缓冲液，保鲜膜封口，置微波炉加热至完全澄清透明取出摇匀，琼脂糖的浓度为1.5%。待琼脂糖凝胶溶液冷却至50℃，再加入1.5ml溴乙锭，使其终浓度为0.5微克/毫升。 2.凝胶板的制备 用制胶器将紫外透光凝胶盘固定好，采用水平仪调整平衡使凝胶盘位于同一水平面。 将适宜的梳子垂直架在凝胶盘内槽的一端，使梳齿