第一节-第二节核酸的凝胶电泳.pptVIP

基因工程原理 第二讲 基因操作的主要技术原理 袁子国 Sep 23，2011 前 言 一、 琼脂糖凝胶电泳 二、 聚丙烯酰胺凝胶电泳 三、 脉冲场凝胶电泳 前 言 核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴定和纯化DNA或RNA片段； 优点：（1）便于分离;（2）便于检测;（3）便于回收。 核酸凝胶电泳的基本原理 1）核酸分子之糖-磷酸骨架中的磷酸基团，呈负离子化状态；核酸分子在一定的电场强度的电场中，它们会向正电极方向迁移； 2）由于在电泳中往往使用无反应活性的稳定的支持介质，电泳迁移率（或迁移速度）与分子的摩擦系数成反比。而摩擦系数是分子大小（构型）、介质粘度等的函数； 因此，可在同一凝胶中、一定电场强度下、可在凝胶上分离出不同分子量大小或相同分子量但构型有差异的核酸分子。 一、 琼脂糖凝胶电泳Agarose gel electrophoresis （一）凝胶的制备及电泳 制胶 1.准备好凝胶成型器，插入成型梳。 2.将1.5g琼脂糖加至100 ml 1×TAE缓冲液中，摇匀。在微波炉中加热至琼脂糖完全熔化，冷却至60