pCAG3flagPP2ACα转基因小鼠构建及高表达系的筛选.PDFVIP

第38卷第3期 南京医科大学学报（自然科学版） 2018年3月 ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING（NaturalScience） ·283 · pCAG⁃3×flag⁃PP2ACα转基因小鼠构建及高表达系的筛选 周建丽，赖娅娜，李树珍，曾文滔* 南京医科大学医药实验动物中心，医药模式动物重点实验室，江苏 南京 211166 ［摘 要］ 目的：构建过表达pCAG⁃3×flag⁃PP2ACα转基因小鼠，筛选高表达稳定遗传系，建立PP2ACα基因相关功能研究模 型动物。方法：将Flag蛋白标签序列与鼠源PP2ACαcDNA转录本设计成融合基因，插入CAG启动子下游，构建过表达载体 pCAG⁃3×flag⁃PP2ACα。通过原核显微注射技术，将线性化pCAG⁃3×flag⁃PP2ACα质粒注射入受精卵雄原核，构建pCAG⁃3×flag ⁃PP2ACα过表达模型小鼠，PCR筛选阳性过表达小鼠。提取阳性过表达小鼠组织总蛋白，在蛋白质水平分析转基因小鼠3× flag⁃PP2ACα的表达。结果：PCR鉴定及测序结果证实，pCAG⁃3×flag⁃PP2ACα转基因载体及过表达pCAG⁃3×flag⁃PP2ACα转 基因小鼠模型构建成功。Westernblot筛选转基因高表达系小鼠。结论：筛选得到pCAG⁃3×flag⁃PP2ACα高表达稳定遗传系小 鼠。 ［关键词］ pCAG⁃3×flag⁃PP2ACα；转基因小鼠；过表达 ［中图分类号］ Q785 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2018）03⁃283⁃05 doi：10.7655/NYDXBN ConstructingofpCAG⁃3×flag⁃PP2ACα transgenicmiceandscreeningofhighlevel expressionsystem ZhouJianli，LaiYana，LiShuzhen，ZengWentao* AnimalCoreFacility，KeyLaboraforyofModelAnimalResearch，NMU，Nanjing211166，China ［Abstract］ Objective：Toconstructover⁃expressingpCAG⁃3×flag⁃PP2ACαtransgenicmice，screenthestablesystemofhighlevel expression，andthereforetoprovideatransgenicanimalmodelforthestudyofthebiologicalfunctionofPP2ACα. Methods：The pCAG⁃3×flag⁃PP2ACαtransgenicvectorswereconstructedbyinsertingmicePP2ACαcDNAandFlagproteinsequencetagtothe downstreamofpCAGpromoter.ThelinearpCAG⁃3×flag⁃PP2ACα plasmidwasinjectedintothezygotenucleusbymicroinjection techniquetogettheover⁃expressingpCAG⁃3×flag⁃PP2ACα mice.Thepositiveover⁃expressionmicewereidentifiedbyPCR.The positiveexpressionoftotalproteininmicewasextractedandtheexpressionoftransgenicmicewasanalyzedattheproteinlevel. Results：ThepCAG⁃3×flag⁃PP2ACαtransgenicvectorandtransgenicmicewassuccessfullyconstructedbyPCRandwasverifiedby plasmidsequenceanalysis.ThesystemofhighlevelexpressiontransgenicmicewasscreenedbyWesternblotassay. Conclusion：The pCAG⁃3×flag⁃PP2ACαtransgenicmicewithstablesystemofhighlevelex