HPLC法测定人红细胞中次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶活性.PDFVIP

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　研究论文　 ｗｗｗ．ｚｇｙｓ．ｏｒｇ ＨＰＬＣ法测定人红细胞中次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶活性 １，２ ２ ２ 马晓琴 　辛华雯　李维亮　（１．南方医科大学　广州５１０５１５；２．广州军区武汉总医院临床药理科） 摘　要　目的：建立一种检测次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（ＨＧＰＲＴ）活性的高效液相色谱法，并检测患者红细胞中ＨＧ ＰＲＴ活性。方法：在５磷酸核糖１焦磷酸（ＰＲＰＰ）条件下，ＨＧＰＲＴ催化次黄嘌呤生成次黄嘌呤核苷酸（ＩＭＰ），高氯酸沉淀蛋 白后进行高效液相色谱法分析。采用ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳＣ （１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５ ｍ）柱；流动相为磷酸氢盐缓冲液乙腈（９９．６∶ １８ μ －１ ０．４），流速１ｍｌ·ｍｉｎ ，在２６２ｎｍ处检测ＩＭＰ。应用新建立的高效液相色谱法测定６８例服用过硫唑嘌呤的肾移植患者红细 －１ －１ 胞中ＨＧＰＲＴ活性。结果：在该条件下，测得的线性范围是２０～６００ ｍｏｌ·Ｌ ，检测限是２０ ｍｏｌ·Ｌ ，其日间和日内精密度 μ μ 均小于５％，方法回收率和提取回收率分别在１００．８１％～１０１．９１％和９９．０５％～１０１．４０％范围内。６５例患者红细胞ＨＧＰＲＴ活 性范围为４４．５９～１２３．８６Ｕ，平均（８７．８３±２１．５５）Ｕ。结论：该法操作简便、灵敏度高、重复性好，适用于临床常规检测。 关键词　次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶；活性；高效液相色谱法 中图分类号：Ｒ９６９．１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００８０４９Ｘ（２０１３）０２０１９６０４ ＡｃｔｉｖｉｔｙＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＨｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅＧｕａｎｉｎｅＰｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌＴｒａｎｓｆｅｒａｓｅｉｎＨｕｍａｎＲｅｄＣｅｌｌｓｂｙ ＨＰＬＣ １，２ ２ ２ ＭａＸｉａｏｑｉｎ ，ＸｉｎＨｕａｗｅｎ，ＬｉＷｅｉｌｉａｎｇ（１．ＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５１５，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＷｕｈａｎＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧｕａｎｇｚｈｏｕＭｉｌｉｔａｒｙＣｏｍｍａｎｄ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｄｅｖｅｌｏｐａｎａｓｓａｙｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅｇｕａｎｉｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒ ａｓｅ（ＨＧＰＲＴ）ｉｎｈｕｍａｎｒｅｄｃｅｌｌｓｂｙＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆ５ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｒｉｂｏｓｅ１ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＰＲＰＰ），ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ ｗａｓｃｈａｎｇｅｄｉｎｔｏｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ（ＩＭＰ）ｕｎｄｅｒｔｈｅｃａｔａｌｙｓｉｓｏｆＨＧＰＲＴ．Ｔｈｅｓａｍｐｌｅｗａｓｄｅｐｏｓｉｔｅｄｂｙｐｅｒｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄａｎｄｔｈｅｎ ａｎａｌｙｚｅｄｂｙＨＰＬＣ．ＡＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳＣ （１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５ ｍ）ｃｏｌｕｍｎｗａｓｕｓｅｄ．Ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓｐｏｔａｓｓｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅ １８ μ －１ ｂｕｆｆｅｒａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（９９．６∶０．４）ａｎｄｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１ｍｌ·ｍｉｎ ．ＴｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆＩＭＰｗａｓ２６２ｎｍ．ＴｈｅＨＧＰＲＴａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｔｈｅｒｅｄｃｅｌｌｓｏｆ６８ｋｉｄｎｅｙｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｐａｔｉｅｎｔｓｔｒｅａｔｅｄｂｙａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｗａｓｌｉｎｅａｒｗｉｔｈｉ