shrna抑制c-fos表达对p-gp介导的乳腺癌多药耐药的影响.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（１２）：８１２ ｓｈＲＮＡ抑制ｃｆｏｓ表达对Ｐｇｐ介导的乳腺癌 多药耐药的影响 师锐赞　胡晓玲　范彦英 （山西医科大学　太原　０３０００１） 摘要　多药耐药 （ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）是导致化疗失败的重要原因，多药耐药基因 （ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅ，ｍｄｒ１）产物Ｐ糖蛋白（Ｐｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐｇｐ）过表达是最主要的耐药机 制。原癌基因ｃｆｏｓ在肿瘤ＭＤＲ中的作用渐受重视。主要选用人乳腺癌敏感株ＭＣＦ７和阿霉素 （ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，ＡＤＲ）筛选的、ｍｄｒ１／Ｐｇｐ高表达的耐药株ＭＣＦ７／ＡＤＲ，探讨ｃｆｏｓ在Ｐｇｐ介导的乳 腺癌ＭＤＲ中的作用。相对于ＭＣＦ７，ｃｆｏｓ在ＭＣＦ７／ＡＤＲ高表达。采用ｓｈＲＮＡ法下调ｃｆｏｓ表达 后，ＭＣＦ７／ＡＤＲ对ＡＤＲ的敏感性大大增强，且 ｍｄｒ１／Ｐｇｐ表达减少、Ｐｇｐ外排功能降低。ｃｆｏｓ 表达下调可逆转对Ｐｇｐ介导的乳腺癌ＭＤＲ的实验结果，为ｃｆｏｓ成为逆转肿瘤耐药诊断和治疗 的新靶标，对实现耐药乳腺癌的分子靶向治疗提供了理论基础。 关键词　ｃｆｏｓ　多药耐药　Ｐ糖蛋白　分子靶向治疗 中图分类号　Ｑ８１９ 　　乳腺癌是女性易患的恶性肿瘤之一，全世界每年 用，为耐药乳腺癌的基因治疗提供实验依据。 约有１２０万妇女患乳腺癌，５０万人死于乳腺癌，严重威 ［１］ １　材料与方法 胁女性的身心健康 。化疗是临床上常用的治疗手 段，但多药耐药 （Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）仍是导致 １．１　材　料 乳腺癌化疗失败的重要原因之一。ＭＤＲ形成机制复 　　重组质粒Ｐｓｉｌｅｎｃｅｒ３．１ｓｉｃｏｎｔｒｏｌ和Ｐｓｉｌｅｎｃｅｒ３．１ｓｉｃ ［４］ 杂，其 中多药耐药基 因（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅ， ｆｏｓ为本课题组前期构建 ，Ｐｓｉｌｅｎｃｅｒ３．１ｓｉｃｏｎｔｒｏｌ为阴 ｍｄｒ１）产物Ｐ糖蛋白（Ｐｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐｇｐ）过表达是最 性对照质粒，Ｐｓｉｌｅｎｃｅｒ３．１ｓｉｃｆｏｓ干扰靶序列为 ｃｆｏｓ 主要的耐药机制，因此靶向Ｐｇｐ介导的ＭＤＲ是目前研 ｍＲＮＡ４２５～４４３；ｃｆｏｓ与 ａｃｔｉｎ引物由上海Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ β ［２］ 有限公司合成；ＲＰＭＩ１６４０培养基、新生牛血清购自 究的热点 。 　　原癌基因ｃｆｏｓ在肿瘤发生、肿瘤细胞增生、转化、 Ｇｉｂｃｏ公 司；ＴＲＩｚｏｌ、无 血 清 培 养 基 ＯＰＴＩＭＥＭ、 血管生成、肿瘤浸润和转移中起非常重要的作用。近 Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染试剂盒购自上海Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ有限 ［３］ 公司；ＭＴＴ、Ｇ４１８、荧光染料罗丹明１２３（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３， 年来，ｃｆｏｓ在肿瘤ＭＤＲ中的作用渐受重视 。本实验 选用人乳腺癌敏感株 ＭＣＦ７和阿霉素（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ， Ｒｈ１２３）购自Ｓｉｇｍａ公司；ＡＤＲ购自深圳万乐药业有限 ＡＤＲ）筛选的、Ｐｇｐ高表达的耐药株ＭＣＦ７／ＡＤＲ，采用 公司；兔抗人抗ｃｆｏｓ多克隆抗体ｓｃ５２、鼠抗人ＧＡＰＤＨ ｓｈＲＮＡ技术抑制 ｃｆｏｓ表达，观察对 ＭＣＦ７／ＡＤＲ的耐 单克隆抗体６Ｃ５、辣根过氧化酶（ＨＲＰ）标记物羊抗兔／ 药性影响，并进一步检测ｍｄｒ１／Ｐｇｐ表达的变化。本课 鼠ＩｇＧ购自ＳｅｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司。 题