三元复合因子net基因的克隆及其真核表达.pdfVIP

·423· 文章编号：1673-8640(2009)06-0423-05中图分类号：Q78 文献标识码：A 三元复合因子Net基因的克隆及其真核表达 李百文1，倪培华2，诸琦1，徐洪3 (1．上海交通大学医学院附属瑞金医院消化内科，上海200025；2．上海交通大学医学院附属瑞金医院 检验系，上海200025；3．上海交通大学医学院基础医学院生物化学教研室，上海200025) 摘要：目的克隆人Net基因。构建Net基因表达载体并诱导融合蛋白表达。方法从正常人脐静脉内皮 细胞(HUVEC)中抽提总RNA。经逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出人全长NeteDNA，构建pEGFP—Nl／Net 重组体质粒。并将其转染入高表达原癌基因c一＆晤的人胰腺癌细胞PANC—l中，分析转染细胞的Net表达水平和 224 对细胞增殖力的影响。结果从人胰腺癌细胞PANC-l中克隆出长约1 bp的Net基因目的片段，成功构建 了重组质粒pEGFP—NI／Net，诱导表达目的蛋白后，Net抑制原癌基因c—f∞的表达，进而抑制人胰腺癌细胞的增 殖。结论构建重组质粒pEGFP．Nl／Net并表达Net融合蛋白，其抑制了细胞的增殖，为进一步研究Net的各种 生物学活性及作用机制奠定了基础。 关键词：Net；克隆；融合蛋白 Cloneof factorNeteDNAand its andfunctionnBaiwenI．NI ternarycomplex analysisexpression School Peihua2，ZHU@，XUHon93．0 1．DepartmentofGastroenterology，Ruijinhospital．MedicalofShanghai Medical School 200025，China；2．Facultyof hospital，Medicalof JiaotongUniversity，Shanghai Laboratory，Ruijin ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200025，China；3．DepartmentofBiochemistry，MedicalSchool旷Shanghai 200025，China) JiaotongUniversity，Shanghai Toclonehuman factorNet therecombinant Abstract：0bjective ternarycOlilplex gene，construct expression and thefusion Net wag RT-PCRfromthe plasmidpEGFP—NI／Netexpress protein．Methods-11legene amplifiedby totalRNAextractedfromhumanumbilicalveinendothelial WaSinsertedintothe cells(HUVEC)．Theamplifiedproduct vectorwhich the fluorescence there