1株高致病性血凝性脑脊髓炎病毒的分离与鉴定.docVIP

1株高致病性血凝性脑脊髓炎病毒的分离与鉴定 中国兽医2007年11月第27卷第6期ChinJVetSciNov.2007Vo1.27No.6781 1株高致病性血凝性脑脊髓炎病毒的分离与鉴定 贺文琦,陆慧君,宋德光,陈艳玲,李志萍,周玉,常灵竹,高丰(1.吉林大学畜牧兽医学院, 吉林长春130062;2.吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室,吉林长春130062) 摘要:利用细胞培养方法从临床表现神经症状的死亡仔猪脑组织内分离获得1株病毒,同时对该病毒进行电镜负 染观察,昆明种小鼠致病性试验,RT—PCR检测和部分基因测序分析.电镜观察可见细胞培养物中有大量的直径约 115nm的冠状病毒样粒子;接种病毒的小鼠均出现典型的神经症状,死亡率100;血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)特 异性引物RT—PCR扩增结果阳性;其S基因序列与GenBank中登录的HEV一67N相应基因序列的同源性高达 99.6.结果表明,分离的病毒为猪血凝性脑脊髓炎病毒,分离株暂命名为HEV—CC一2007. 关键词:猪血凝性脑脊髓炎病毒;分离鉴定;序列分析 中图分类号:$852.65文献标识码:A文章编号:1005—4545(2007)06—0781—04 Isolationandidentificati0nofahighpath0genicityhemagglutinatingen- cephalomyelitisvirus HEWen—qi,LUHui—jun,SONGDe—guang,CHENYan—ling,LIZhi—ping,ZHOUYu, CHANGLing—zhu,GAOFeng(1.CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine, JilinUniversity,Changchun130062,China;2.KeyLaboratoryforZoonoses,MinistryofEducation, InstituteofZoonoses,JilinUniversity,Changchun130062,China) Abstract:Ahighpathogenicityhemagglutinatingencephalomyelitisvirus(HEV)strainwassuccessfullyisolat— edfrombraintissuesofdiedpigswithclinicalnervesymptomfromapigfarmofChangchuninChinabycellscul ture.Theviruseswereidentifiedbyelectronmicroscope,Kunmingmiceregressiontest,RT—PCRandpartialgene sequencesanalysis.Electronmicroscoperevealedthecoronavirus—likevirionsthatmeasuredapproximately115nm indiameter,allthemicewerediedafterinoculatingtheviruses,andthespecificamplifiedfragmentswereobtained byRT—PCRofHEVprimers.SubsequentanalysisindicatedthesequenceofpartialSgeneofthevirusshareda99. 6similaritywiththestandardstrainofHEV一67NinGenBank.Theresultsshowedthatthestrainwasahigh pathogenicityHEVstrain,andmainlandofChina,andwasnamedHEV—CC一2007. Keywords:porcinehemagglutinatingencephalomyelitisvirus;isolationandidentification;sequenceanalysis *Correspondingauthor 血凝性脑脊髓炎病毒(Hemagglutinatingen— cephalomyelitisvirus,HEV)是引起猪血凝性脑脊 髓炎的一种病原,属于冠状病毒科Ⅱ型冠状病毒群 的成员[1J.国内外研究资料报道,该病原主要侵害 1～3周龄的仔猪,成年猪也可隐性感染并产生高滴 度的抗体J.HEV感染仔猪后在临床上主要呈现出 呕吐,衰竭和神经症状2种类型,死亡率高达20 收稿日期:2007—09—28 基金项目:国家自然科学基金资助项目;吉林省科技 发展计划重点资助项目(200