高级_生化课件生物化学技术方案原理与应用.ppt

生物化学技术原理及应用;; 第一编 概 述;第一章 生命大分子物质的制备;第一节 材料的选择与处理;一、材料的选择;二、材料的处理;;第二节 确定测定方法;一、目的和要求;二、常用的测定方法;;;;;;;;;第三节 细胞的破碎;1.物理方法;2.化学处理;3.生物方法 ;第四节 抽提;一、抽提的含义 ;二.抽提有效成分的影响因子;;;; 6.氧化 一般蛋白质或酶含有必需集团巯基，若抽提液 中存在氧化剂或氧分子时，会使巯基形成分子内或分子间二硫键，导致蛋白质变性。为此，常加入2-巯基乙醇、半胱氨酸还原剂。 植物组织和微生物细胞中含酚类物质，在多酚氧化酶作用下，可变为有色的醌类物质。加入苯基硫脲，可抑制这一反应。 ;;;第五节 浓缩 ;;;;;;;;;第六节 纯化方案的设计与评价;一. 纯化方案的设计 纯化的总原则：考虑抽提液中有效成分与杂质的理化性质差异，几种方法组成一个科学合理的纯化方案 切忌：一种方法重复使用 ;;;第二章 沉淀法;第一节 基本原理与沉淀类型;一、基本原理;二、制备蛋白质;1. 盐析法;;;;;;;;;2. 有机溶剂沉淀法;3. 蛋白质沉淀法;4. 聚乙二醇沉淀法;5. 选择性沉淀法;6.结晶沉淀法;三、制备核酸;1.DNA/RNP复合物的解聚;2.多糖等杂质的消除;;; 在核酸溶液中加入某些有机溶剂和非离子型 聚合物等试剂时，核酸会被有效沉淀出来。 (1)有机溶剂：乙醇-盐溶液、乙丙醇 (2)聚乙二醇 (3)CTAB;第二节 应用实例;一、皮磷酸二酯酶的纯化;第三章 吸附层析;第一节 吸附柱层析;一、常用术语;;;;;;;;;;;;二、基本原理;三、吸附剂;;;;;四、洗脱剂;五、层析柱的制备与层析操作;;;;;;六、应用与实例;;;第二节 薄层层析;;一、主要操作过程;;;;;二、应用实例;第三节 聚酰胺薄层层析;一、基本原理;二、应用实例;第四章 疏水层析;;第一节 基本原理;一、疏水作用;二、吸附剂;第二节 操作与应用;一、层析柱的制备;二、加样与洗脱;三、应用实例;第五章 离子交换层析;第一节 基本原理（图）;;第二节 离子交换剂的分类及性质;;一、分类;;;二、性质;;;第三节 离子交换剂与缓冲液的选择;一、离子交换剂的选择;;;;二、缓冲液和洗脱液的选择;三、??样量的测定;第四节 操作;一、离子交换剂的处理、再生和转型;;二、分离物质的交换;三、物质的洗脱和收集;;第五节 应用;一、制备、纯化生命物质;;第六章 凝胶过滤;;第一节 凝胶的分类及性质;一、葡聚糖凝胶;;;;二、琼脂糖凝胶;三、聚丙烯酰胺凝胶;四、Sephacryl;五、Superdex;第二节 基本原理 （图）;;;第三节 操作;一、凝胶的选择和处理;;;;二、凝胶柱的制备;;;;三、加样与洗脱;;;四、凝胶柱的再生及保存;;;第四节 应用;一、脱盐和浓缩;二、分离生命物质;;三、去热源物质;四、测定分子质量;用葡聚糖凝胶柱色谱法测定蛋白质分子质量;; 第七章 亲和层析;第一节 基本原理（图);;第二节 操作;一、基质的选择;二、配体的选择;三、亲和吸附剂的制备;四、特异性吸附;五、分离大分子物质;;;六、亲和层析柱的再生;第三节 提高吸附剂的操作容量;第四节 应用实例;一、纯化大分子物质;;;;;第八章 聚焦层析;第一节 基本原理;一、多缓冲剂和多缓冲交换剂;;;二、聚焦层析原理;;;;第二节 操作;一、多缓冲剂的选择;二、多缓冲交换剂用量的确定;三、多缓冲交换剂的处理;四、样品的准备;五、上样和洗脱;六、样品中多缓冲剂的去除;第三节 应用;第九章 高效液相色谱;;第一节 基本原理(图）;;一、进样系统;二、输液系统;三、分离系统;四、检测系统;五、数据处理系统;第二节 反相高效液相色谱;;一、固定相、流动相和色谱柱;;;;第三节 应用;一、定性定量分析;二、 测定酶活性;第三篇 鉴定方法;第十一章 标记;第一节 核酸标记;一、标记物的制备及类型;二、非核素标记;;;;;;;;;二、非核素标记;三、核素标记;四、标记物纯化;五、探针的鉴定;第二节 蛋白质标记;一、标记方法;二、核素和非核素标记;;;;;第十四章 生物芯片;第一节 基因芯片;一、基本原理和工作流程;;;;;;二、制备及操作;;;;;;;;;;;三、应用实例;第二节 蛋白质芯片;一、原理及特点;;二、制备与操作;;三、应用实例;;第三节 芯片实验室;第十五章 聚合酶链反应;第一节 基本原理;一、反应系统;;;;;;二、反应过程及条件;第二节 PCR的类型;第三节