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在线酶切系统Perfinity 结合LCMS-8050 定量检测人IgG 摘要：本文建立了使用岛津在线酶切系统Perfinity 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 联用定量 测定人IgG 的方法。测定了IgG 的两个典型多肽，柱上检出限低至fmol 级别。快速自动酶解 Perfinity 结合LCMS-8050 的快速和高灵敏度完全满足IgG 高通量和高灵敏度的要求。 关键词：人IgG 在线酶切系统Perfinity 三重四极杆质谱仪LCMS-8050 免疫球蛋白G （IgG ）是人体血浆中含量最高的一种同种型抗体，也是免疫系统的一种主要 成分。因其在治疗和临床上的优势，众多制药企业和研究单位对研究IgG非常感兴趣。本文建立 了使用新一代血浆分离器Noviplex卡快速采集血浆，在线酶切系统Perfinity和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050联用定量测定人IgG 的方法。供相关检测人员参考。 1. 实验部分 1.1 仪器 岛津在线酶切系统Perfinity 三重四极杆质谱仪LCMS-8050 系统 1.2 标准品 人IgG 和牛血清白蛋白（BSA ）购自Sigma Aldrich （ St. Louis, MO.） 1.3 分析条件 在线酶切系统Perfinity 条件 ① 酶切：注入5 μL 样品（经还原和烷基化处理），以胰蛋白酶色谱柱在50℃下自动酶解6 min ； ② 脱盐：酶解产物多肽以在线脱盐柱捕集，进行脱盐处理； ③ 洗脱： 离线分析：以梯度洗脱方式洗脱，自动收集约2 mL 多肽到96 孔板中，供LCMSMS 分析用。 在线分析：以梯度洗脱方式洗脱至LCMSMS 系统进行分析。 洗脱条件如下： 流动相A ：98%水-2% 乙腈-0.1% 甲酸 流动相B ：10%水-90%乙腈-0.1% 甲酸 流速：1.0 mL/min 梯度洗脱程序：2% B （ 0min ）-60% B （2min ） 33 LCMS-8050 分析条件： 液相色谱条件 色谱柱：Waters Acquity C18 2.1 mm I.D.× 100 mm L.,1.7μm 流动相A ：0.1% 水 流速：0.4 mL/min 进样体积：10 μL （离线分析） 5 μL （在线分析） 柱温：50℃ 洗脱方式：梯度洗脱，B 相初始浓度为2% 流动相B ：0.1% 乙腈 梯度时间程序见表1 表 1.梯度洗脱程序 Time(min) Module Command Value 0.20 Pumps Pump B Conc. 2 8.00 Pumps Pump B Conc. 50 9.50 Pumps Pump B Conc. 50 10.00 Pumps Pump B Conc. 90 12.50 Pumps Pump B Conc. 90 12.51 Pumps Pump B Conc. 2 16.00 Controller Stop 质谱条件 分析仪器：LCMS-8050 加热气：10 L/min 离子源：ESI，正离子扫描 脱溶剂管温度：250℃ 雾化气：氮气2 L/min