1章 蛋白质3教材课程.pptx

第四节 蛋白质的理化 性质和分离纯化;; NH3 + OH- NH 3+ OH- NH2 P P P COOH H+ COO- H+ COO- 蛋白质的阳离子 蛋白质的兼性离子 蛋白质的阴离子 pHpI （等电点） pHpI ;蛋白质所带电荷和其周围包绕的水化膜是维持蛋白质在水溶液中稳 定的两大因素。脱水和中和电荷可以导致蛋白质的沉淀。;（三）蛋白质变性、沉淀和凝固;2.;3、酚试剂呈色反应：lowry法 先发生双缩脲反应，再与磷钨酸-磷钼酸试剂反应生成深蓝色的钨蓝和钼蓝 4、考马斯亮蓝法：Bradford法;二、蛋白质的分离纯化 （一）蛋白质分离纯化的一般程序 1、材料的选择和预处理（去毛皮、去壳等） 2、破碎细胞（超声、匀浆、反复冻融） 3、提取纯化（盐析、层析、离心、电泳等） 4、浓缩干燥及保存 ;（二）一般注意事项 1、减少变性降解：步骤少、时间短、低温、温和 2、蛋白质浓度适中：μg/ml ~ mg/ml范围 3、选择合适缓冲液及pH，防止目标蛋白沉淀 4、使用特殊制剂：蛋白酶抑制剂、DNA酶、还原剂DTT等 5、避免反复冻融及剧烈震荡 6、使用灭菌试剂，防止微生物污染;（三）蛋白质分离纯化的原理和方法 ;1、利用溶解度差异分离蛋白质;2、利用分子大小差异分离蛋白质;超滤（ultrafiltration）: 在一定的压力下，使蛋白质溶液在通过一定孔径的 超滤膜时，小分子量物质滤过，而大分子量的蛋白质被 截留，从而达到分离纯化的目的。这种方法既可以纯化 蛋白质，又可达到浓缩蛋白质溶液的目的。 ;* 超速离心;* 凝胶过滤; 蛋白质带电量越多，分子量越小，则在电场中泳动速度就越快；反之，则泳动速度越慢。;聚丙烯酰胺凝胶电泳;等电聚焦（isoelectric focusing,IEF）:;等电聚焦 ( IEF );;4、根据结构功能的特异性分离蛋白质 * 亲和层析 抗原-抗体、酶-底物、激素-受体等可以可逆地特异性结合;三、蛋白质的结构分析 （一）一级结构分析：测序 Edman降解法、推演法、质谱法等 （二）空间结构分析 X射线晶体衍射分析法、磁???振、圆二色光谱、傅里叶变换红外光谱等;本章小结; 一、A型题（1-32) 1.使蛋白质和酶分子显示巯基的氨基酸是 A.蛋氨酸 B.胱氨酸 C.半胱氨酸 D.谷氨酸 E.赖氨酸 ;2.蛋白质分子引起280nm光吸收的最主要 成分是 A.肽键 B.半胱氨酸的-SH基 C.苯丙氨酸的苯环 D.色氨酸的吲哚环 E.组氨酸的咪唑环 ; 3.以下哪一种氨基酸不具备不对称碳原子 A.甘氨酸 B.丝氨酸 C.半胱氨酸 D.苏氨酸 E.丙氨酸;4.维系蛋白质一级结构的化学键是 A.氢键 B.肽键 C.盐键 D.疏水键 E.范德华力; 5.组成蛋白质的基本单位是 A.L-α-氨基酸 B.D-β-氨基酸 C.L-β-氨基酸 D.L,D-α-氨基酸 E.D-β-氨基酸;7.蛋白质多肽链具有的方向性是 A.从3＇端到5＇端 B.从5＇端到3＇端 C.从C端到N端 D.从N端到C端 E.以上都不是;二、B型选择题(33-52) A.碱性氨基酸 B.亚氨基酸 C.芳香族氨基酸 D.含硫氨基酸 E.含羟基氨基酸 33.脯氨酸 34.色氨酸 35.蛋氨酸 36.丝氨酸 37