上【生物】2011届高三一轮复习汇编课件：基因工程.ppt

选修3 现代生物科技专题 ;考纲内容及能力要求 ;基础梳理 ;;2.基因工程的基本工具 (1)“分子手术刀”—— __________ ①来源：主要是从__________中分离纯化出来的。 ②功能：能够识别双链DNA分子的某种__________的核苷酸序列，并且使每一条链中__________部位的两个核苷酸之间的__________断开，因此具有__________性。 ③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：__________和__________。;(2)“分子缝合针”——__________ ①两种DNA连接酶（E?coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较： a.相同点：都缝合__________键。 b.区别：E?coliDNA连接酶来源于__________，只能将双链DNA片段互补的__________之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合__________，但连接平末端之间的磷酸二酯键效率较__________。 ②与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将__________加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接__________的末端，形成磷酸二酯键。;(3)“分子运输车”——__________ ①运载体具备的条件 a.能在受体细胞中复制并稳定保存。 b.具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 c.具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 ②最常用的运载体是__________,它是一种裸露的、结构简单的、独立于__________核区DNA之外，并具有__________的双链__________DNA分子。 ③其他运载体：__________、__________。;归纳整合;（3）另外还介绍几种酶 ①解旋酶：该酶能在DNA复制或转录时破坏DNA碱基对间的氢键，从而将双螺旋打开。 ②DNA水解酶：该酶能催化DNA水解。 ③RNA聚合酶：该酶能在转录时将单个的核糖核苷酸连接成RNA单链。 ④限制酶：该酶的作用是识别特定的核苷酸序列，并在特定位点上切割DNA分子。; 三、基因工程的操作工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶简称限制酶，主要存在于原核生物中，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 例如，从大肠杆菌中发现一种限制酶只能识别GAATTC序列，并在G和A之间将这段序列切开。苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因，就能被该种限制酶切割下来。 DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形???——黏性末端和平末端（如下图所示）。;注 ：①用限制酶切割DNA分子时，被破坏的是DNA链中的磷酸二酯键（即连接相邻两个脱氧核苷酸的键）。 ②黏性末端是指双链DNA分子被限制酶切开后，切口处的两个末端伸出的由若干特定核苷酸组成的单链。;2.“分子缝合针”——DNA连接酶 DNA连接酶能催化两条DNA链的相邻两个碱基之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核苷酸连接起来。DNA连接酶有两类：一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为E?coli DNA连接酶；另一类是从T4噬菌体中分离出来的，称为T4-DNA连接酶。E?coli DNA-连接酶只能连接将双链DNA片段互补的黏性末端。而T4-DNA连接酶既可以连接双链DNA片段互补的黏性末端，又可以连接双链DNA片段的平末端。;3.“分子运输车”——基因进入受体细胞的运载体 (1)使用运载体的目的 在基因工程中使用运载体有两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。 (2)运载体的种类 现在所利用的运载体主要有两类：一类是细菌的质粒，它是一种相对分子质量较小、独立于细菌核区DNA之外的双链环状DNA。另一类运载体是噬菌体或某些灭活的病毒等。现在人们还在寻找新的运载体，如叶绿体或线粒体等也可能成为运载体。;(3)基因的运载体必须具备的条件 ①运载体DNA必须有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到运载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而导致其自身失活。 ②运载体DNA必须具备自我复制的能力，或可以整合到受体染色体DNA上随受体染色体DNA的复制而同步复制。 ③运载体DNA必须带有标记基因，以便重组后进行重组分子的筛选。 ④运载体DNA必须是安全的，不会对受体细胞有害，不能进入到除受体细胞以外的其他生物细胞中去。; ;跟踪训练; 解析：从这三个切点进行酶切，可得到片段种类有四种（即a、b、c、d四种）；从其中二个切点进行酶切，可得到不同于前面的片段种类有三种（