曲师大酶工程课件知识讲稿.ppt

Company Logo 2.部分生长偶联型（又称延续合成型） 酶的合成在细胞的生长阶段开始，在细胞生长进入平衡期后，酶还可以延续合成较长一段时间。 特点：可受诱导，一般不受分解代谢物和产物阻遏。 所对应的mRNA相当稳定。 黑曲霉聚半乳糖醛酸酶合成曲线 Company Logo 3. 非生长偶联型（又称滞后合成型） 只有当细胞生长进入平衡期以后，酶才开始合成并大量积累。许多水解酶的生物合成都属于这一类型。 特点：受分解代谢物的阻遏作用。 所对应的mRNA稳定性高。 黑曲霉酸性蛋白酶合成曲线 Company Logo 总结：影响酶生物合成模式的主要因素 高：可在细胞停止生长后继 1）mRNA的稳定性 续合成酶 差：随着细胞停止生长而终 止酶的合成 2）培养基中阻遏物的存在 不受阻遏：随着细胞的生长而开始酶的合成。 受阻遏：细胞生长一段时间或平衡期后，酶才开始 合成。 Company Logo 酶生产中最理想的合成模式： 延续合成型：发酵过程中没有生长期和产酶期的明显差别。细胞开始生长就有酶的产生，直至细胞生长进入平衡期后，酶还可以继续生成一段时间。 对于： 同步合成型：提高对应的mRNA的稳定性，如降低发酵 温度 。 滞后合成型：尽量减少甚至解除分解代谢物阻遏，使 酶的合成提早开始。 中期合成型：要在提高mRNA稳定性以及解除阻遏两方 面努力。 Company Logo (二)细胞生长动力学 在分批培养(batch culture)过程中，细胞生长一般要经历延迟期、指数生长期、减速期、静止期和衰亡期5个阶段。 Company Logo 细胞生长曲线 O-A 延迟期 A-B指数生长期 B-C减速期 C-D 静止期 D-E 衰亡期 Company Logo 营养物浓度（生长限制基质浓度）和生长速率之间的动力学关系：Monod模型 μ:比生长速率（1/h） （specific growth rate） μmax：最大比生长速率（1/h） S：营养物浓度（生长限制基质浓度） 克/L Ks：莫诺德常数或饱和常数或营养物利用常数 克/L，或 mol/L。ks为Monod常数，是指在比生长速率达到最大比生长速率一半时限制性基质的浓度，即是说，当μ＝0.5μm时，S=Ks Company Logo (三) 产酶动力学（宏观） 一般产酶动力学方程可表达为： 式中 X——细胞浓度(g /L) ?——细胞比生长速率(h-1) ?——生长偶联的比产酶系数(IU/g) ?——非生长偶联的比产酶速率(IU/(g?h)) E——酶浓度(IU/L) t——时间(h) Company Logo 二、植物细胞 糖苷酶 胡萝卜细胞 ?－半乳糖甘酶 紫苜蓿细胞 漆酶 假挪威槭细胞 过氧化物酶 甜菜细胞 大豆细胞 ?－葡萄糖苷酶 利马豆细胞 酸性转化酶 甜菜细胞 碱性转化酶 甜菜细胞 糖化酶 甜菜细胞 苯丙氨酸裂合酶 花生细胞 大豆细胞 木瓜蛋白酶 番木瓜细胞 超氧化物歧化酶 大蒜细胞 菠萝蛋白酶 菠萝细胞 剑麻蛋白酶 剑麻细胞 木瓜 凝乳蛋白酶 番木瓜细胞 Company Logo 人黑色素瘤细胞 中国仓鼠卵巢细胞（CHO) 动物细胞 小鼠骨髓瘤细胞 牛内皮细胞 Company Logo 二、 培养基的配制 碳源 氮源 基本组分