生物化学-4(酶-1)技术知识.ppt

中间产物学说已经得到一些可靠的实验依据。如，用光谱法证明了含铁卟啉的过氧化物酶参加反应时，单纯的酶的吸收光谱与加入了第一个底物H2O2后确实产生了变化。 过氧化物酶含有铁卟啉，酶溶液呈红褐色，在645、583、548、498nm处有特征吸收光谱。当向酶溶液中加入过氧化氢后，酶液变成红色，只吸收561、530.5nm的光，说明酶与底物之间发生了作用而形成新的物质。若此时再加入氢供体（如焦性没食子酸），吸收光谱变回原来的四个条带，酶液又变回红褐色。 三、活性中心和必需基团 ◆ 酶的结构与功能的关系。 ◆定义：通常将酶分子中直接与底物结合，并和酶催化作用直接有关的结构区域叫酶的活性中心（active center），或活性部位（active site）。 ◆ 酶的活性中心包括两个功能部位: ◆ 结合部位（基团）：由一些参与酶和底物结合、有一定特性的基团组成。直接与底物结合，决定酶的专一性决定同酶的专一性相关。 ◆ 催化部位（基团）：由一些参与催化反应的基团组成，底物的键在此处被打断或形成新的键，从而发生一定的化学变化。直接参与催化反应，决定酶所催化反应的性质。 ◆ 有些基团同时具有以上两种功能。 ◆ 参与构成酶的活性中心和维持酶的特定构象所必需的基团称为酶分子的必需基团。 活性中心与必需基团关系 必需基团 活性部位 维持酶的空间结构 结合基团 催化基团 专一性 催化性质 ◆ 活性部位的基团都是必需基团。 ◆ 必需基团包括活性中心基团和其外的对维持酶活性空间构象所必需的一些基团。 ◆ 分布：活性中心基团在一级结构上相距甚远，但由于多肽链的盘旋折叠，在空间结构上往往相距很近，形成有一定空间结构的区域。 多分布于分子表面，呈裂缝状。 消化道蛋白酶作用的专一性 1、 结构专一性 概念：酶对所催化的分子（底物）化学结构有特殊的要求和选择。 类别：绝对专一性和相对专一性 （1）、绝对专一性(absolute specificity) 有的酶对底物的化学结构要求非常严格，只作用于某一种底物，对其它任何物质均无作用,如脲酶。 （2）、相对专一性(relative specificity) 酶对底物的结构要求比较低，可作用于在结构上相似的某一类底物。根据酶选择的对象不同又分为： 键专一性：指酶对所作用键的选择性，如酯酶催化酯的水解，对于酯两端的基团没有严格的要求，可水解任何醇与酸形成的酯（键）。 O R1C-O-R2+H2O R1-COOH+ R2-HO 酯酶 基团专一性（族专一性）： 指酶对所作用的键及键一侧的基团的选择性，如α-D-葡萄糖苷酶、胰蛋白酶。 胰蛋白酶，水解硷性氨基酸的羧基形成的肽键。 2、立体异构专一性 概念：酶只能催化一种立体异构体发生某种化学反应，而对另外立体异构体无作用。 类别：旋光异构专一性和几何异构专一性 （１） 旋光异构专一性 酶对所作用底物立体构型的选择性，即当底物具有旋光异构体时，酶只能作用于其中的一种。 L-氨基酸氧化酶 L-AA+H2O+O2 --－－－ →α-酮酸+NH3+H2O （2）几何异构专一性 指酶对所作用底物顺反异构的选择性，如延胡索酸酶（顺乌头酸酶）。 延胡索酸酶 延胡索酸－－－－－－ → 苹果酸　　　　(反式)　 顺-丁烯二酸－－×－ → （三）、反应条件温和 酶促反应要求一定的pH 、温度等温和的条件，凡是能使蛋白质变性的因素都可使酶失活；强酸、强碱、有机溶剂、重金属盐、高温、紫外线、剧烈震荡等任何使蛋白质变性的理化因素都可能使酶变性而失去其催化活性。 因此，酶作用一般都要求比较温和的条件如常温（20-40?C） 、常压和接近中性（pH 5-8 ）的酸碱度。 （四）、酶活力可调节控制 酶是生物体的组成成份，和体内其他物质一样，不断在体内新陈代谢，酶活力的调控方式很多，包括酶的生物合成的诱导和阻遏，抑制剂调控、共价修饰调控、反馈调控、酶原激活及激素调控等。这些调控保证酶在体内新陈代谢中发挥其适当的催化作用，使生命活动中的种种化学反应都能够有条不紊、协调一致地进行。