生物技术知识制药课件.ppt

理想的微载体应具备： 1.生物相容性 2.无毒性，表面惰性 3.比重适当（1.030～1.045g/ml） 4.粒径均一，在60～250?m之间（溶胀后） 5.光学透明 6.柔软 7.耐高压灭菌温度、反复多次使用 8.制备简单、原料充分。 ⑵包埋和微囊培养 该培养方法与微载体的不同之处在于细胞不是贴附在载体表面,而是被包埋在凝胶载体或微囊内. 优点： ①可防止细胞在培养过程中受到物理损伤; ②可以获得较高的细胞密度； ③当控制微囊膜的孔径后，可以使产品浓缩在微囊内，从而有利于下游产物的纯化。 ④可采用多种生物反应器进行大规模培养。 ⑵包埋和微囊培养 缺点是: ①微囊制作复杂, 成功率不高; ②微囊内死亡的细胞会污染正常产物; ③收集产物必须破壁, 不能实现生产连续化。⑶结团培养 利用细胞本身形成结团的特点，相互结团后再用悬浮的方法培养，操作简便，节省了用于微载体的成本。 1、分批式 2、流加式（补料分批式） 3、半连续式 4、连续式 5、灌流式 二、动物细胞培养的操作方式 在用细菌生产时被普遍采用，但在动物细胞培养中用得较少 1、分批式培养（batch culture） 分批式培养是指先将细胞和培养液一次性装入反应器内进行培养，细胞不断生长，同时产物也不断形成，经过一段时间的培养后，终止培养。 0 培养时间（d） 细胞密度 分批式培养的生长曲线 延滞期 对数生长期 减速期 平稳期 衰退期 优点：分批培养是一种准封闭系统，在培养过程中除了控制温度，不断进行通气和加入酸碱溶液调节PH外，与外界没有其他物料交换。操作简单，这是目前最为广泛使用的一种培养方式。 0 时间 分批 分批式培养过程的特征 缺点：在分批培养过程中，不向培养系统补加营养物质，而只向培养基通入氧，能够控制的参数只有PH、温度和通气量，因此细胞所处的生长环境随着营养物的消耗和产物、副产物的积累时刻都在发生变化，不能使细胞自始至终处于最优的条件下，获得的细胞密度也有限，因而分批培养并不是一种很好的培养方式。 废产物 营养物 PH、温度、DO 为什么说采用分批式培养细胞效果不佳？ 流加式培养是指先将一定量的培养液装入反应器，在适宜的条件下接种细胞，进行培养，使细胞不断生长，产物不断形成，而在此过程中随着营养物质的不断消耗，不断地向系统中补充新的营养成分，使细胞进一步生长代谢，直到整个培养结束后取出产物。 流加式培养只是向培养系统补加必要的营养成分，以维持营养物质的浓度不变。由于流加式培养能控制更多的环境参数，使得细胞生长和产物生成容易维持在优化状态。 2、流加式培养（feeding culture） （补料分批培养） 流加式培养有何特点？ 0 时间 流加 图11-11 流加式培养过程的特征 PH、温度、DO 营养物 2、流加式培养（feeding culture） （补料分批式） 废物、产物 优点：由于只有料液的输入，没有输出，因此发酵液的体积在增加。与分批发酵相比，通过向培养系统中补充物料，可以使培养液中的底物浓度较长时间的保持在一定的范围内，既保证了菌体细胞的生长需要，又不造成阻遏抑制等不良影响，从而达到提高产物浓度的得率的目的。 缺点:容易造成产物的积累，容易染菌，而且中间补料会造成发酵液的稀释。 2、流加式培养（feeding culture） （补料分批式） 根据流加控制方式不同，有两种流加式培养方式： 无反馈控制流加 有反馈控制流加：一般是连续或间断地测定系统中限制性营养物质的浓度，并以此为控制指标来调节流加速率或流加液中营养物质的浓度等。 定流量流加 间断流加 2、流加式培养（feeding culture） （补料分批式） 半连续式培养又可称为反复分批式培养，是指在分批式培养的基础上，将分批培养的培养液部分取出，并重新补充加入等量的新鲜培养基，从而使反应器内培养液的总体积保持不变的培养方式。 3、半连续式培养（semi-continuous culture） 优点: 操作简便，生产效率高，可长期进行生产，反复收获产品，而且可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。 缺点：首先放掉发酵液的同时会损坏未被利用的营养物质和正处于代谢活跃状态的菌体细胞。其次中间补料会造成发酵液的稀释，增加下游提取液的体积，再次，发酵液中一些由代谢产生的前体有可能丢失，造成发酵产物产量的影响，此外染菌问题也是影响发酵过程能否进行的重要因素。 3、半连续式培养（semi-continuous culture） 连续式培养是指将细胞种子和培养液一起加入反应器内进行培养，一方面新鲜的培养液不断加入反应