醋酸泼尼松的生物转化.pdfVIP

醋酸泼尼松的生 物转化 醋酸泼尼松（Predisone acetate ）又称醋酸 强的松，是一种活性极高的糖皮质激素药物。 醋酸泼尼松呈白色结晶、无臭、味初苦，后 有持久苦味。熔点234～241℃，不溶于水， 微溶于甲醇，易溶于三氯甲烷。在临床上有 促进脂肪和蛋白质的分解、抑制糖氧化、调 节糖代谢等生理功能。广泛用于治疗阿狄氏 疾病、风湿症、类风湿性关节炎、红斑性狼 疮等胶原性疾病，支气管哮喘、皮炎等过敏 性疾病，眼炎及急性白血病，也用于某些感 染性疾病的综合治疗。 一、实验目的  1. 了解醋酸泼尼松生物合成原理。 2. 掌握醋酸泼尼松的生物转化工艺过程 二、实验原理  醋酸泼尼松的生产是以醋酸可的松作底物， 利用微生物产生的生物酶进行结构转化而得。 简单节杆菌在生长过程中产生的C1、2脱氢 酶，在醋酸可的松的A环C1、2位引入双键形 成。反应式如下： H COCOH C 3 2 O H COCOH C 3 2 O O OH O OH O O 醋酸可的松（CA ） 醋酸泼尼松（PA） 简单节杆菌产生的脱氢酶，专一性很高，醋酸泼尼松的转化率达到97 ％，而 传统的SeO2化学脱氢法转化率只有40 ％。 三、实验材料  1、实验仪器  高压蒸汽灭菌锅，回转式恒温调速摇床，三 用紫外光灯，层析缸，三角瓶，试管，烧杯， 移液管等。  2、实验材料与试剂  ⑴ 菌种：简单节杆菌（Arthrobacte simplex ）  ⑵ 培养基（g/100ml ）  ① 种子培养基：  葡萄糖1%、蛋白胨0.5%、玉米浆1.0%、 KH2PO4 0.25%  ② 发酵培养基：  葡萄糖1%、蛋白胨0.5%、玉米浆1.0%、 KH2PO4 0.25%、PH调至7.0  ⑶ 原料：醋酸可的松（底物）  ⑷ 相关试剂：硅胶GF254、1％TTC水溶液（氯 化四唑）、20 ％硅胶液、乙醇、展开剂、醋酸可 的松的标准品溶液，醋酸泼尼松的标准品溶液和 待测样品溶液。 四、实验方法与步骤  1、种子培养  2、甾体底物转化和酶活力的测定 取发酵液8ml放入试管中，在30℃水浴中保温3min 。 然后加入3滴1％TTC水溶液，混匀 （注意：一定要在水浴 中保温混匀，有利于酶活检测），开始计时，观察培养液 的颜色变化。记录颜色开始变色、变红、变紫的时间，以 此表示酶活力。（根据颜色变化的快慢定性地判断底物添 加前、后酶活力的相对高低） 3. 转化产物鉴定和转化率的测定