实验9_黄柏中生物碱的分离_氧化铝柱子.ppt

小檗碱的纯化—氧化铝柱色谱纯化 一、实验目的和要求 1.了解柱层析的实验原理。 2.熟练掌握的柱层析的操作。 二、实验原理 柱层析法的分离原理：是根据物质在固定相上的吸附力不同而使各组分分离。一般情况下极性较大的物质易被氧化铝吸附，极性较弱的物质不易被氧化铝吸附。 当采用溶剂洗脱时，发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸的过程，吸附力较强的组分，移动的距离小，后出柱；吸附力较弱的组分，移动的距离大，先出柱。 常用的固定相：聚酰胺 、氧化铝 、硅胶、大孔树脂 。。。每种填料都有自己的不同用途 三、实验仪器和试药 1.仪器 玻璃层析柱、试管 2.试药 粗提的小檗碱、氧化铝、乙醇 四、实验步骤 1.取一根直径约1.5cm，长约40cm带玻璃活塞的色谱柱，（若没有滤芯的话，在柱子的下端填一层松紧合适平整的脱脂棉，添的稍微稀松些），将其垂直地固定在铁架台上。 2.柱内先加入3ml体积的乙醇，打开活塞，放出柱内乙醇，然后再加入乙醇至距色谱柱的下端的棉花1-2cm处，关闭活塞。 11.蒸干收集的溶液，备用！ 五、注意事项 1.搅拌时候要均匀，尽量赶走空气。 2.氧化铝柱填装好之后，避免振药，以免发生断层，影响药物的分离。 3.没有颜色的乙醇可以重复利用淋洗，节省试剂。 4.收集需要的带颜色的溶剂。 六、思考题 1.柱层析都有哪些填料？每种填料主要进行哪种物质的分离，分别举一个例子。 2.柱色谱操作有哪些注意事项？ * 湿法装柱 3.取中性氧化铝（100—200目)约15g于烧杯中，加入一定体积的乙醇调成浆状，顺时针搅拌，赶尽气泡。 4.然后经玻璃漏斗将浆状氧化铝徐徐注入柱中，当氧化铝到达柱底时，打开活塞，让洗脱剂缓缓流出，使氧化铝沉降均匀，当柱内液面接近氧化铝柱最上层时，关闭活塞。 5.按照柱子的内径，剪一张合适的滤纸，再轻轻盖上，不要破坏最上层，加上3颗玻璃珠。 湿法上样 6.称取约200mg盐酸小檗碱粗提取物，放入烧杯，加少量乙醇（溶解即可）于水浴上加热溶解 7. 小心倒入柱子中，勿使氧化铝柱面受到振动，之后开启活塞，当液体表面下降接触到氧化铝柱最上层面时，关闭活塞。 8.再用非常少量乙醇淋洗柱内壁，将沾于管壁周围的样品液轻轻洗入柱面上，至洗净后关闭活塞，准备进行洗脱。 洗脱 9.用滴管吸取乙醇，由管壁轻轻加入柱内，开启活塞，控制流速20-30滴/min。 10.不断加入乙醇，保持色谱柱内乙醇高度不低于最上层滤纸界面2-3cm高度。 11.待氧化铝柱上呈现不同颜色的色带时，继续冲洗，使其彼此分离，并收集开始流出的鲜黄色带，此段为盐酸小檗碱，其余色带为其他成分。 *