梁光义 - 抗乙肝一类新药Y101的研究.ppt

* 抗鸭乙肝病毒实验图片 Y101对DHBV感染雏鸭模型实验 * Y101雏鸭血清DHBV-DNA斑点杂交放射自显影照片 T0 T7 T14 P3 T0 T7 T14 P3 T0 T7 T14 P3 T0 T7 T14 P3 T0 T7 T14 P3 NS 低剂量 中剂量 高剂量 拉米夫定 * Y101在雏鸭体内对DHBV-DNA的抑制作用 各用药组与NS组动物DHBV-DNA抑制率比较 * Y101在雏鸭体内对DHBV-DNA的抑制作用 各组动物用药前后DHBV-DNA抑制率自身比较 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% T7 T14 P3 Y101 高剂量 Y101 中剂量 Y101 低剂量 3TC 生理盐水对照组 抑制率(%) * Y101体内外抗HBV实验的结论： 体外实验：Y101最大无毒浓度为50 μg/mL,在最大无毒该浓度时，对HBsAg、HBeAg和HBV- DNA均有明显的抑制作用，并有明显的剂量依赖关系。 体内实验：Y101体内HBV- DNA的复制有较强的抑制效果，并有明显的剂量依赖关系 ，且停药后“反跳”不明显。 * Y101抗HBV 作 用 靶 点 抑制病毒 DNA复制 抑制HBsAg 抑制HBeAg * Y101抗HBV的初步机理研究 Y101对HBV的聚合酶和逆转录酶没有作用， 对HBVcccDNA。有抑制作用。 HBV复制机理和治疗方法的不同作用位点 * HBV DNA、cccDNA的含量测定 Y101配成50 、25、12.5μg/mL 三个剂量 恩替卡韦(3μg/mL)对照组 1%DMSO对照组 收集细胞指标检测 每4d换药,培养8d,停药4天 荧光定量PCR 普通PCR * 普通PCR测定cccDNA的表达 2.2.15细胞内 cccDNA特异性PCR扩增结果（1. 1% DMSO对照组 ,2. Ent 3μg/mL ,3. Y101 12.5μg/mL ,4. Y101 25 μg/Ml,5. Y101 50 μg/mL ） * 荧光PCR测定：Y101对cccDNA的抑制作用 Y101对cccDNA具有明显的抑制作用，且抑制率与浓度有相关性，而且停药4天以后无明显反跳现象。 * Y101体内实验：肝脏组织的保护作用： 检测DHBV-DNA 取血 雏鸭注射DHBV 7天后取血 确定DHBV-DNA阳性后分组，药物治疗10天 取肝 HE染色 停药3天后 检测DHBV-DNA * 治疗前后鸭肝脏组织病理学改变( HE染色,×200) (a)正常鸭组 (b) DHBV模型鸭组 (c) 3TC 鸭组 肝小叶完整，肝细胞呈条索状 肝小叶完全被破坏，肝细胞严重 肝小叶较完整，可见肝细胞有、 排列，肝细胞未见病变。 变性、坏死。 灶状坏死。 (d)Y101小剂量鸭组 (e)Y101中剂量鸭组 (f) Y101高剂量鸭组 肝小叶模糊不清，可见肝细胞变 肝小叶清晰可见，肝细胞轻度变 肝小叶完整，汇管区清晰，可见 性、坏死。 性，未见肝细胞坏死。 少量炎性细胞浸润。 Y101具有保护肝细胞的作用。 * Y101保肝机理的研究（ALT） CCl4 WT 8231±619 WT+Y101 5200±1615 Nrf2_Null 13362±2981 Nrf2+Y101 11439±4935 Gal/LPS WT 3349±1082 WT+Y101 1721±679 Nrf2-Null 3414±1116 Nrf2+Y101 2139±972 Phalloidon WT 8749±2197 WT+Y101 6772±1175 WT+OA 37±7 Microcystein WT 7623±1922 WT+Y101 2160±1437 Nrf2-Null 5911±2010 Nrf2+Y101 5131±1565 * ii) 体内吸收特性预试验：口服吸收良好，生物利用度高达64%。iii）药物代谢