第六章-目的基因与载体DNA的连接th.pptVIP

第六章 目的基因与载体DNA 的连接 目的基因与载体DNA的连接 ——形成重组体DNA 重组体DNA：载体DNA+引入的DNA 连接过程即DNA分子体外重组技术，主要依赖于核酸内切酶和DNA连接酶的作用，部分还要要借助其他酶。 连接方式（基因与载体DNA的结构特点） 一、粘性末端DNA的连接 1、单酶切粘性末端 2、双酶切粘性末端 3、不规则粘性末端 二、平末端DNA的连接 1、直接连接法 2、同聚物加尾法 3、衔接物连接法 4、DNA接头连接法 5、PCR法引入酶切位点的连接 一、粘性末端DNA的连接 1、单酶切粘性末端 2、双酶切粘性末端 3、不规则粘性末端 1、单酶切粘性末端 仅有一种限制性核酸内切酶酶切产生的粘性末端，如EcoR Ⅰ 限制性内切酶 DNA连接酶 缺点： （1）易发生自我环化作用： 可用碱性磷酸酶处理，目的DNA的5’-P转化为5’-OH，连接导入受体细胞后，自动修复。 （2）发生非定向连接： 因单酶切，粘性末端都一样，两个方向插入都可。 2、双酶切粘性末端 由两种内切酶酶切产生的DNA片段所具有的粘性末端： （1）同尾酶酶切 两粘性末端相同，连接类似于单酶切方式。 （2）非