技术百人1 项,参加中科院方.PDFVIP

活体分析化学实验室 2011 年度工作总结 主任：陈 义 副主任：毛兰群 主任助理：汪福意 本年度共承担各类国家项目 45 项：主持国家基金委重大研究计划 1 项、重 大国际合作 1 项、重点项目 1 项、仪器专项 2 项、面上基金 14 项、主任基金 2 项，参加面上基金 1 项；主持“973”课题 1 项、“863”项目 1 项、重大科技专 项子课题 1 项，参加“973”课题 6 项；主持中科院科研装备项目 1 项、方向性 项目课题1项、实施中科院“百人计划”1项、“技术百人”1项，参加中科院方 向性项目课题1项、仪器项目1项；其他项目8项。 一、主要研究工作进展 1. 仪器研制 构建了一套数字波离子阱颗粒质谱新系统，该系统可以工作在没有分子泵的 低真空条件，使用三角波和方波简化了实验电子学系统，获得了和正弦波类似的 实验结果，并准确测定了健康和贫血红细胞的质量（32.6pg 和 29.1pg）；使用 格林函数方法，求解了平面离子阱的囚禁特性，获得了不同参数下平面阱的势能 分布、阱深和稳定区。 2．生物识别与选择分析 （1）信号转导与抗癌药物 ① 结合计算机辅助设计技术，尝试不同的设计策略，在此前合成的含有金 属配位位点的蛋白酪氨酸激酶抑制剂的基础上，设计、合成了 15 个多靶点金属 钌配合物。ELISA 和 Docking 分析结果表明，3 个 Ru DMSO 配合物和 6 个有机 金属钌配合物较好地保持了其中的配体对表皮生长因子受体（EGFR ）的特异性 抑制活性。体外细胞活性测试表明，一个三价钌 DMSO 配合物和 5 个有机金属 钌配合物对人乳腺癌细胞株 MCF-7 的EGF 刺激生长表现出选择性的抑制活性， 证明了我们多靶点金属抗肿瘤配合物设计思路的正确性和可行性。 ② 应用 TiO2 磁性空心微球（MHMSS ）分离富集蛋白酪氨酸激酶 EGFR 的 磷酸化底物肽，实现了高灵敏度、高选择性的磷酸化肽的 MALDI-TOF MS 定量 测定。该方法用于蛋白激酶抑制剂的快速筛选及 IC50 值的测定，避免了使用昂贵 的生化试剂和放射性同位素标记试剂，在大规模蛋白激酶抑制剂快速筛选中将有 广阔的应用前景。 ③ 应用LC-MS/MS 方法分析鉴定了抗肿瘤药物顺铂与血清白蛋白的结合位 点，研究发现，除能与蛋白表面的蛋氨酸、组氨酸残基结合外，顺铂还能与血清 白蛋白上的67、247 位组氨酸残基形成交联复合物，占据锌在该蛋白上的结合位 点，干扰人体对锌元素的摄入，导致锌缺乏综合征。这一研究结果在 Chem. Commun.上发表后，Chemistry World 和 CE News 都进行了评述和推介。 ④ 发展、建立基于质谱分析的药物相互作用组学研究方法，比较研究了有 机金属钌抗肿瘤化合物及顺铂与转铁蛋白（Tf ）的相互作用和作用位点。研究发 现，顺铂倾向于与蛋白表面的蛋氨酸残基结合，而钌配合物倾向于与蛋白表面的 组氨酸残基配位。进一步的研究表明，尽管顺铂和钌配合物与 Tf 的结合，不影 响 Tf 与其受体 TfR 的特异性识别，但是，与 Tf 结合显著降低顺铂的生物利用度， 而对有机金属钌化合物的生物利用表现出一定程度的增强作用。 6 ⑤ 比较研究了有机金属钌化合物[( -p -cymene)Ru(XY)Cl]PF6 （XY= acac (1) ，en (2) ）与蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B 的相互作用。两种化合物都能与表面的 His195 ，His296 ，Met133 ，Met256 ，Cys32 和 Cys121 残基结合，化合物 1 还能 与PTP1B 位于“ 口袋” 内的催化位点Cys215 结合，并诱导巯基氧化生成亚磺酰基， 所以化合物 1 对 PTP1B 表现出很高的抑制活性。这一发现表明有机金属钌化合 物有可能通过与 PTP1B 的共价结合，抑制PTP1B 的催化活性及其对胰岛素介导 的信号转导过程的负调节作用，有望成为II 型糖尿病治疗的先导化合物。 ⑥ 应用 HPLC-MS 分析，研究了有机金属钌抗肿瘤化合物在双链 DNA 上的 迁移行为。结果表明，结合在鸟嘌呤碱基上的钌经由 SN1 路径在双链上迁移， 双链的形成破坏有机金属钌化合物上的氨基氢与鸟嘌呤碱基的氢键是导致钌迁 移的主要驱动力。 （2）生物分子相互作用及其分析应用