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第七章 微生物的生长繁殖 内容提要： 1.微生物生长繁殖的概念 2.微生物生长繁殖的测定方法 3.微生物的典型生长曲线及不同时期的特点 4.微生物的连续培养方法和应用 （1）概念 细菌两次细胞分裂的时间间隔。 （2）影响 正常情况下，世代时间稳定 世代时间受培养环境的影响。 不同的微生物，生长繁殖速度不同，世代时间也有不同。 一般，原核微生物的繁殖速度大于真核微生物。好氧微生物快于厌氧微生物。 测生长量 一、培养方法 分批培养：将少量细菌接种于一定量的液体培养基内，在适宜的温度下培养，并定时取样测定活细菌数目或重量的变化。 连续培养：流入新鲜培养基的同时不断流出培养物的培养方式，即一方面连续进料，另一方面又连续出料的培养方式 1. 停滞期 　　 又称适应期，指少量微生物接种到新培养液中后，在开始培养的一段时间内细胞数目不增加的时期。 （二）影响停滞期长短的因素 ① 接种菌龄：接种龄即“种子” 的群体生长年龄，亦即它 处在生长曲线上的哪一个阶段。实验证明，如果以对数期接种龄的“种子”接种，则子代培养物的停滞期就短。 ② 接种量：接种量的大小明显影响停滞期的长短。（基数大） ③ 营养：营养丰富培养基中停滞期短；营养贫乏培养基中停滞期长。 2. 指数期 又称对数期，是指在生长曲线中，紧接着延滞期的一个细胞以几何级数速度分裂的一段时期。 3. 稳定期 又称静止期或最高生长期。 (一) 特点 细胞数目不增加，即处于新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等，或正生长与负生长相等的动态平衡之中 菌体产量达到了最高点，而且菌体产量与营养物质的消耗间呈现出一定的比例关系 细胞长、大 对不良条件敏感，抵抗力降低 形成糖原、异染颗粒等贮藏物 多数芽孢杆菌开始形成芽孢 有的微生物开始合成抗生 素等次生代谢产物 （一）特点 个体死亡的速度超过新生的速 度(繁殖数死亡数)，整个群 体就呈现出负生长 细胞形态多样，例如会产生很多膨大、不规则的退化形态 利用贮藏物进行内源呼吸，发生自溶 有的微生物在这时产生或释放对人类有用的抗生素等次生代谢产物 在芽孢杆菌中，芽孢释放往往也发生在这一时期 主要是外界环境对继续生长越来越不利，从而引起细胞内的分解代谢大大超过合成代谢，继而导致菌体死亡。 营养物耗尽，细菌利用贮存颗粒进行内源呼吸造成自身溶解； 有毒代谢物积累，抑制细菌生长等。 两种连续培养方式： 恒浊连续培养 恒化连续培养 设备：恒化器 是一种以恒定流速进水，以相同速率流出代谢产物，使细菌始终在低于其最高生长速率条 件下进行生长繁殖的一种 连续培养装置。 通过控制某一种营养物的 浓度，使其始终成为生长 限制因子的条件下达到的。 在连续培养中，微生物的生长状态和规律与分批培养不同，往往是处在相当于分批培养中生长曲线的某一生长阶段。 如：废水生物处理的连续运行过程中，活性污泥中的微生物处在相当于分批培养生长曲线的生长阶段：加速期或对数期，或静止期或衰亡期。 四、细菌生长曲线在废水生物处理中的应用 在废水生物处理的连续运行过程中，活性污泥中的微生物只是处于间歇培养曲线的某一生长阶段。 对数期：微生物活力强，但不易凝聚和沉淀 ；有机物出 水浓度相对较高。 静止期：污泥代谢活性和絮凝沉降性能均较好。 衰亡期：有机物含量低，BOD5/CODCr小于0.3的废水，用 延时曝气法。 思考 1.细菌典型生长曲线是什么?不同时期的特点及影响因素是什么？ 2.细菌生长曲线在废水生物处理中的应用及原理是什么？ 是代谢、生理研究的良好材料 是增殖噬菌体的最适宿主菌龄 是发酵生产中用作“种子”的最佳种龄 G染色鉴定时采用此期微生物 （四）指数期的应用 （二）稳定期到来的原因 ① 营养物尤其是生长限制因子的耗尽； ② 营养物的比例失调，例如C／N比值不合适等； ③ 有害代谢产物的累积； ④ pH、氧化还原势等物化条件越来越不适宜。 生产菌种的发酵厂在稳定期初期收获菌体或代谢产物。 此外，由于对稳定期到来的原因进行研究，还促进了连续培养技术的设计和研究。 （三）稳定期的应用 4.衰亡期 （二）衰亡期的原因 与菌种的遗传特性有关: 有些细菌的培养经历所有的各 个生长时期，几天以后死亡，有些细菌培养几个月乃至 几年以后仍然有一些活的细胞； 与营养物质和有毒物质有关：补充营养和能源，以及中 和环境毒性，可以减缓死亡期细胞的死亡速率，延长细 菌培养物的存活时间。 （三）影响衰亡期的因素 三、细菌的连续培