规范血液及骨髓标本细菌学标准规范操作规程.doc

目的 血液及骨髓标本操作规程，确保检验结果准确可靠。 适用范围 血液及骨髓。 标本 3.1 标本类型血液及骨髓。 3.2 标本采集　采血时间抗菌药物治疗前，发热初期或高峰时抽血。采血对怀疑菌血症的成人患者，推荐同时在不同部位采集2~3套对感染性心内膜炎和真菌血症则应多次婴幼儿患者，推荐同时在不同部位采集2套。采血量骨髓标本用骨髓穿刺针从髂骨采集 3.3 标本拒收标准 血培养瓶破裂或明显污染。 培养瓶标识与化验申请单不符。 用过期的培养瓶集标本，采血量不足等。 对于不合格标本，应及时通知采集人员重新留取标本。 3.4 标本保存 采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，切勿放冰箱。冬季血培养瓶在送检过程应采取一定的保暖措施。 试剂仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、中国蓝平板、相关生化试剂等。 4.2 全自动血培养系统、ATB Expression鉴定。成人血培养瓶，、儿童血培养瓶、4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2 培养等。 4.4 。 细菌鉴定和药敏质控 。检验步骤 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。门诊病人要同时登记联系电话等病人信息。 6.1 自动化培养 置全自动血培养仪中。当时，仪器发出阳性报警，应立即用无菌注射器抽取瓶内培养液作直接涂片革兰染色，镜检，将结果向临床医生报告转种血琼脂平板，中国蓝平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置35℃CO2 培养箱培养1824h。从琼脂平板上挑取菌落进行涂片染色及触酶和氧化酶试验。革兰阳性菌和革兰阴性菌分别选用上机进行细菌鉴定和药敏试验或者做K-B法药敏试验（具体操作见）。6.2 手工培养 6.2.1 将血培养瓶置35℃孵育箱，经18~20 h孵育在血琼脂平板或巧克力平板上盲目转种一次。 6.2.2 盲目传种后，培养瓶继续孵育至第5日，每日观察一次有无菌生长，并摇匀继续培养，下列几种情况提示有细菌生长。见下表。 表培养瓶中有细菌生长时的不同反应 菌种 浑浊并有凝块 金黄色葡萄球菌 均匀浑浊，发酵葡萄糖产气 大多为革兰阴性菌 微浑浊，有绿色变化 肺炎链球菌 表面有菌膜，培养液清晰，底层溶血 枯草杆菌 表面有菌膜，膜下呈绿色浑浊 铜绿假单胞菌 血细胞层上面出现颗粒状生长，有自上而下的溶血 溶血性链球菌 厌氧培养瓶有变化，而需氧培养瓶无细菌生长 可能为厌氧菌 根据肉眼观察，对有细菌生长迹象，涂片作革兰染色分离培养，接种需氧血琼脂平板中国蓝平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置35℃CO2 培养箱培养18～24h。操作流程 结果报告 8.1 阳性结果报告报告通常分为三级： 8.1.1一级报告阳性报警血培养瓶应进行涂片革兰染色，将涂片结果电话（或其他方式）通知临床，同时记录报告的日期、时间、内容以及接收报告人的姓名。8.1.2 二级报告报告直接药敏试验结果。 直接药敏试验，将血培养阳性标本进行革兰染色，如涂片找到细菌，根据革兰染色结果选择药敏所用培养基（Muller-Hinton或含5%羊血Muller-Hinton琼脂平板），取阳性血培养标本约0.2ml，用无菌棉签均匀涂布于琼脂表面，根据革兰染色结果选择所用抗菌药物的纸片，如镜检见革兰阴性杆菌，选择肠杆菌科常用的抗菌药物纸片；若为革兰阳性球菌，成对排列，选择葡萄球菌用的抗菌药物纸片。然后置35℃，孵育h读取初步药敏结果。纯培养再进行菌株鉴定和药敏试验，发最终报告。 注最终结果如与初报告不符，应及时与临床沟通，并在书面最终报告注明变更内容。 8.1.3 三级报告报告细菌种属、药敏试验、结果评价和建议。 8.2 阴性结果报告血培养72h未见细菌生长，应通知临床医师，以便作相应处理，但培养瓶要继续培养至第5日，方可发出阴性报告。如果发现有菌生长，可补发报告。 8.3 对发出报告进行销号，并作好菌名或无菌及报告日期登记。 8.4 传染病报医务部。 8.5 传染病菌种保存(伤寒沙门菌)交疾病控制中心复核。临床意义引起败血症的多为耐药性金黄色葡萄球菌、某些革兰阴性杆菌及部分球菌。疖、痈、脓肿和化脓性骨髓炎继发的败血症主要由金黄色葡萄球菌和β溶血链球菌引起，尿道、胆道、胃肠道炎症和黏膜损伤引起的败血症以大肠埃希菌最常见，烧伤后铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌多见。伤寒和副伤寒病程第1～2血液细菌培养，伤寒和副伤寒沙门菌的检出率可达80%～90%。 危急值报告仪器报警阳性标本直接涂片、革兰染色，确定细菌，向临床报告细菌涂片结果。 参考文献1 CNAS-GL23《医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南》, 202周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解. 第二版. 上海: 上海科学技术出版社, 20073 叶应妩, 王毓三, 申子瑜主编.全国临床检验操作规