6 免疫球蛋白标记技术应用_PPT课件.pptVIP

二、ELISA试验条件的选择 免疫吸附条件 酶标记的抗体（或抗原） 酶的底物 洗涤液 酶反应终止液 阳性对照品和阴性对照品 * (一）免疫吸附条件 固相载体 包被的方式 包被用抗原 包被用抗体 包被的条件 封闭 * 1. 固相载体的选择 不参与化学反应 ，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性 吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近 最常用的是聚苯乙烯微量滴定板 * 吸附性能检查方法 人IgG包被 加入酶标抗人IgG 抗体 加底物显色 终止酶反应，测每孔吸光度。 控制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右。计算全部 读数的平均值。所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10% 。 对比测定阳性血清和阴性血清，观察是否存在明显差异，若二者相差10倍以上为合格 * 2.包被的方式 抗体的包被一般采用直接吸附法 蛋白质抗原大多也可采用与抗体相似的方法包被 抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时，可采用间接捕获包被法,抗体预包被 （也适用含杂质多的或含量低的抗原） 非蛋白质抗原可采用特殊的包被方式例如，DNA或脂类物质作为包被抗原 包被 (coating)，是抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。 * 3.包被用抗原 天然抗原 重组抗原 合成多肽抗原