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学术干货：共聚焦显微镜中荧光团的共定位 在多标荧光样品图像中，因两个或多个荧光团在显微结构中距离很近，经常会有发射信号叠加，这种效应就称为共定位。目前，高特异性合成荧光团和经典免疫荧光技术的应用、精密光切技术的应用、共聚焦和多光子显微镜提供的数字图像处理技术等大大提高了生物样品中共定位检测的能力。 图 1 共定位在生物表述上是这样定义的：两个或多个不同的分子位于样品上同一个物理位置。对显微镜中看到的组织切片、单个细胞或亚细胞器官，共定位意味着不同的分子连接到同一个受体上；在数字图像方面，这个术语指的是不同荧光分子发射的颜色分享图像中的同一个像素。在共聚焦显微镜中，样品被记录成含有很多像元的多维阵列数字图像，每个像元代表一个三维像素。像元的尺寸（或检测单元）由物镜的数值孔径、照明波长以及共焦检测针孔直径等决定。因此，在一个样品中两个荧光探针的共定位，比如发绿光的 Alexa Fluor488，发橘红色光的 Cy3，在图像中就是由含有红色和绿色两者贡献的像素表示（经常产生各种各样的橘色和黄色）。 举一个例子， 图 1 的一系列图表明了骨骼肌动蛋白和黏着斑蛋白侧向光学平面上的共定位（激光扫描共聚焦显微镜中的 XY 面）。这些共定位点可作为肌动蛋白丝的成核位点，也可作为外部介质、质膜和肌动蛋白骨架之间的交联剂。图 1（ a）是 Alexa Fluor 568 通道（目标对象是黏着斑蛋白），