现代发酵工程.pptVIP

实验室小型发酵罐 实验室小型发酵罐 实验室中型发酵罐 离心机结构 小型冷冻干燥机 小型冷冻干燥机高燥腔结构 中型冷冻干燥机 中型冷冻干燥机 水分测定仪 一：微生物生长动力学 一：发酵方式 1：罐批发酵：在灭菌培养基上接种相应微生物，然后不再加入新的培养基； 2：补料分批发酵：发酵过程不断加入营养物，但不除去旧的培养物； 3：连续发酵：不断加入新培养基，同时除去等量含微生物培养基，需通氧气，有时需加入酸或碱。 二：罐批发酵微生物生长动力学特征 微生物生长分为六个典型时期： 1：延滞期：细胞适应不同环境阶段 2：加速期： 3：指数期：细胞特定生长速率保持不变 4：减速期：对数期末底物耗尽时 5：稳定期：某种关键底物耗尽或一种/几种抑制性代谢产物积累，细胞生长停止。次期细胞发生巨大变化，某些情况下合成有高商业价值的产物 6：衰亡期：能量耗尽、代谢停止。绝大多数商业发酵过程进入次期前就已停止 微生物生长的六个典型时期 三：补料分批发酵 静止期微生物会产生蛋白水解酶，有可能分解重组微生物产生的任何一种蛋白，利用重组微生物发酵必须阻止进入静止期。 控制操作：分为无反馈操作、有反馈操作； 检测参数主要包括有机酸、pH、CO2等。一般工业发酵采用有反馈操作，添加培养基可根据实际情况修正，应用较广。 四：连续发酵 生产成本比罐批发酵低很多，原因在于： 1：设备投资少：生产同样量产物所用反应器体积小；每次收获细胞或产物量小，所需各种设备规模小； 2：单位产率高：发酵周期长、停工时间短 3：生产持续性能好：发酵周期长、细胞生理状态一致 4：易于实现生产过程自动化 5：有利于研究微生物生理、生态、反应机制等 不足之处： 1：发酵时间持续500-1000小时，培养过程中可能丢失质粒 2：长时间保持无菌状态难度较大，替代设备投资高 3：工业用培养基稳定性不理想 应用举例： 1：罐批发酵： 2：补料分批发酵： 3：连续发酵： 二：发酵过程优化 一：溶氧 设计反应器时必须考虑到监测溶氧水平、供氧、使氧气有效混合、分散气泡的方法。 二：pH 绝大多数微生物在pH5·5-8·5时生长较好，发酵过程中必须对培养基pH进行监测，适当添加酸或碱，使pH保持稳定。 三：生物反应器 一：生物反应器 基本类型与特点 完成生物催化反应的核心设备。 可分为两类： 细胞生物反应器 酶生物反应器 1：生物反应器基本类型 搅拌釜式反应器： 气泡柱式反应器； 气升式反应器； 喷射式反应器； 水平环流式反应器 。 搅拌釜式反应器 至今应用最广 优点： 操作条件灵活、易买到、气体运输效率高、可广泛用于微生物发酵 气泡柱式反应器 优点：结构简单、造价低、能耗少、操作成本低、噪音少 缺点：气泡上升过程中逐渐变大，可能造成气体分布不均匀，需在室外安装，需高压空气（可能产生气泡） 气升式反应器 二：典型大规模发酵系统举例 串联气升式反应器系统中完成两步发酵： ——T4DNA连接酶大规模生产 在一个反应器中进行两步发酵： ——三体融合蛋白Agβgal大规模生产 ——T4DNA连接酶大规模生产 生长阶段，30℃ 诱导阶段42 三：影响重组微生物发酵效率的其它因素 1：基因拷贝数 2：启动子类型 3：诱导物 4：衰减子 5：宿主内源性蛋白降解重组蛋白 6：利用DNA重组技术改造代谢途径 * 现代生物技术 与 人 类 现代发酵工程 大型发酵罐群 大型发酵罐群 实验室小型发酵罐 实验室小型发酵罐 转 头 中空纤维膜细胞培养系统 细胞培养系统 喷雾干燥机 喷雾干燥机工作流程 延滞期 加速期 指数期 减 速 期 稳定期 衰亡期 三：温度 发酵基本参数之一 四：搅拌混合 使细胞养分供应充分，防止有害代谢产物局部积累，有效营养混合，有效热传导。 搅拌产生剪切力可能使微生物或动物细胞产生破坏；体系温度升高；细胞活力减低。找到充分混合与细胞破坏间的平衡点。 五：灭菌 寻找营养不过度破坏、杀死微生物最佳温度和时间 六：培养基组成 1：含微生物生长和蛋白产生的全部营养物，C/N 2：微生物生长培养基与产物合成培养基成分不同 3：培养基组成有利于产物分离 4：生长因子 七：重组微生物安全性 1：反应器设有故障自动停止系统 2：采用标准方法使微生物脱离反应器前被灭活 3：用过培养基保证不含活微生物细胞 *