云南省德宏州梁河县第一中学人教版高二生物选修三课件：1.2基因工程的基本操作程序 (共39张PPT).ppt

基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的结构基因 获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 1.从基因文库中获取目的基因 1) 基因文库的概念: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的 群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。 2) 基因文库的种类: 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 基因组文库与部分基因文库的关系 3)基因组DNA文库与cDNA文库 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 限制酶 与运载体连接导入 基因组文库 cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体连接导入 cDNA文库 某种生物某个时期的mRNA 基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较 怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢? 依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性 4)从基因文库中得到目的基因的方法 2、利用PCR技术扩增目的基因 PCR——聚合酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 通过此技术，可获取大量的目的基因。 以__ ___方式扩增， 即___ _（n为扩增循环的次数） 指数 2n 方式 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 结果 原理： DNA双链复制 PCR技术 前提： 条件 PCR扩增仪 一段已知目的基因的核苷酸序列 模板DNA； DNA引物； 四种脱氧核苷酸； 热稳定DNA聚合酶（Taq酶） PCR技术的操作过程 a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________ b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 d.重复a.b.c步骤：每重复一次，目的基因增加___倍 一 PCR技术扩增与DNA复制的比较 DNA复制 PCR技术 场所 原理 条件 解旋方式 酶 特点 结果 碱基互补配对原则 碱基互补配对原则 四种脱氧核苷酸、模板、酶、ATP 四种脱氧核苷酸、模板、酶、引物 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化解旋 半保留复制、边解旋边复制 半保留复制、全解旋再复制 体外复制 主要在细胞核内 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶、解旋酶等 反转录法 目的基因的信使RNA 目的基因 化学合成法 肽链氨基酸序列 信使RNA序列 基因的核苷酸序列 目的基因 合成 推测 推测 单链DNA 合成 3. 人工合成—化学合成法 基因较小，核苷酸序列已知，可以利用DNA合成仪人工合成 二、基因表达载体的构建 ——基因工程的核心 1、目的： 所需物质： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 它们各自的作用是什么? 2、基因表达载体的组成： 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 它们各自的作用是什么? 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来 ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 注意 启动(终止)转录 启动(终止)翻译 作用 位于DNA上 位于mRNA上 位置 DNA片段 三个相邻碱基 本质 启动(终止)子 启始(终止)密码子 三.将目的基因导入受体细胞 1.转化： 2.方法： 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞