寄生虫标本的采集、保存和观察.pptVIP

第七章寄生虫标本的采集、保存、制作和观察方法 一、寄生虫标本的种类： （一）浸渍标本：5~10%福尔马林或7%酒精；适宜于昆虫、蠕虫和组织、器官。 （二）干制标本：防腐处理后干燥保存；适宜于有翅昆虫、吸虫的中间宿主。注意防潮、防霉、防蛀。 （三）玻片标本： 涂片标本（临时性）：检查血液或组织内的寄生虫，肠道和腔道内的原虫；如弓形虫、疟原虫、球虫内生发育阶段虫体； 整封标本（永久性）：用于较小的蠕虫、昆虫或虫体的一部分； 切片标本（永久性） ：组织或器官内的寄生虫；或大型虫体的局部切片。 采集标本需要： 1、采集标本之前，应先了解所要采集的寄生虫的形态、生活史、寄生部位、生活习性以及地理分布等基本生物学特性。 2、采集过程需要：1）详细记录；2）保存标本的完整；3）作好工作人员的防护。 3、剖检家畜时寄生虫标本的采集按以下顺序收集样品，以采集标本：血液、皮肤、皮下组织、脏器、脑脊髓。 二、蠕虫标本的采集、保存和观察方法 蠕虫标本包括：成虫、虫卵和幼虫。 一般步骤： 采集 →清洁→ 固定→脱固定液 →染色 → 分色 ↓ ↓ ↑ ↓ ↓保存→ → → → 脱水 瓶装标本 ↓ 透明 ↓ 制片 （一）采集与清洁：注意采集标本的完整性，同时进行标本的清洁；生理盐水冲洗，一些虫体需在接近体温的生理盐水中放置（微振数分钟），洗去体表附着物，排出肠道内容物。 （二）固定与保存： 固定的作用： 使标本的形态、结构和成分被化学试剂固定下来使之与生活时相仿； 防止组织细胞自溶和腐败； 沉淀和凝固细胞内的物质，以使不同成分产生不同的折光率便于染色后的识别； 有些固定剂有助染的功能，可与细胞中的蛋白质结合，又能与染料结合； 固化组织，不易变形。 根据不同需要放入合适的固定液中固定；转入保存液中保存，等待进一步使用。 固定方法： 物理方法：热、冰冻或干燥等； 化学方法：固定剂，单一或混合，根据需要选择使用； 固定剂分类： 还原剂：酒精、甲醛、甲醇等； 氧化剂：苦味酸、重铬酸钾、锇酸等。 固定剂种类： 单一固定液：5~10%福尔马林，70%酒精，0.3~5%醋酸，甲醇等； 混合固定液：多种 卡氏（Carnoy)固定液：纯酒精:冰醋酸:氯仿=6:1:3， 多用于细胞学染色前固定，一般0.5~4小时，固定后用95%酒精洗涤2次，也可保存于80%酒精。可用于多种染色。 鲍氏(Bouin)固定液: 苦味酸饱和溶液:40%福尔马林:冰醋酸=15:5:1，用前配制。 一般固定12~24h,可继续保存在70%酒精中，对苏木素和酸性复红易于着色。 固定注意事项： 洗净后立即固定； 大块组织修成直径不超过5 mm的小块； 固定小型虫体或组织时，在容器底部垫上棉花，使固定液均匀渗入； 固定液最好新鲜配制； 固定后如果不及时制作标本，转入相应保存液中。 浸渍标本保存在相应的标本缸内，贴上标签、日期、虫种、采集地区等。 （三）染色 染色：组织或细胞的不同部分染上不同的颜色，产生不同的折光率，使组织或细胞内的构造在显微镜下显得更加清晰。 染料：有色的有机化合物，与被染组织间有亲和力。由发色团和助色团2部分组成。 染料分类： 天然染料：苏木精、胭脂红、卡红等； 人工染料：多由煤焦油中提出的，亦称煤焦油染料。根据化学反应不同分为：碱性染料和酸性染料。 碱性染料：大多为氯化物、硫酸盐和醋酸盐，其染色作用基团是阳离子。常用的是： 美蓝：主要的细胞核染料，常用1~2%的水溶液； 碱性复红：细胞核染料，配制成碳酸复红，可以作为昆虫几丁质染色剂，易褪色，不宜用于永久制片保存。 甲苯胺蓝：常用0.3~1%的水溶液，用于原虫的染色。 孔雀绿：一般做活体染色；又可作为指示剂显示活细胞内容物。用0.01~1%的水溶液。 吖啶橙：活体染色剂；也是重要的荧光素，用于原虫和蠕虫幼虫的荧光染色。可使原虫的DNA发