植物组织培养技术模版课件.ppt

植物组织培养技术 主讲：蒋贵生 概述 什么是植物组织培养：植物组织培养（Plant tissue culture）是指在无菌条件下，将离体的植物器官（根、茎、叶、花等）、组织（如形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞），以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株，统称为植物组织培养。 植物组织培养流程图 植物组织培养的过程可概括为： 脱分化 再分化 根、茎、叶 外植体 愈伤组织 或 完整植物 胚状体 ⊙ 茎尖、茎段、胚及子房等器官做外植体可不经脱分化直接形成试管苗。  ⊙植物组织培养原理：一是细胞的全能性；二是再生作用，与植物体分离的器官具有恢复完整植株的能力。 ⊙ 组织培养类型：愈伤组织培养、器官培养、茎尖培养、原生质体培养、悬浮细胞培养。如花药培养：培养离体花药易获得单倍体植物。  植物组织培养技术是生物技术的重要组成部分，在生产实践及基因工程、遗传转化等研究中有重要应用前景。植物脱毒及离体快繁，花药培养与单倍体育种、幼胚培养与试管受精，抗性突变体的筛选与体细胞无性系变异，植物产品的工厂化生产等方面的研究和应用，均必须借助植物组织培养技术的基本程序和方法。 微繁有许多优势： 红芽芋种苗 试管苗 红芽芋栽培技术 一、植物组织培养所需仪器设备 1．实验室：药品室、称量室、洗涤室、配剂室、消毒室、接种室、培养室等。2．仪器设备：高压灭菌锅（器）、光照培养箱、振荡培养箱、电子天秤、酸度计、超净工作台、煤汽炉、铝锅等。3．器械及用具：镊子、手术刀、接种针、细菌过滤器、牛皮纸、记号笔等。4．玻璃器皿：三角瓶、培养瓶、培养皿、量筒、容量瓶等。 培养室 超净工作台 培养架 二、培养基的制备 1．营养母液的配制在植物组织培养中，不同的植物，不同的器官和组织，不同的研究目的，使用不同的培养基，培养基尽管千差万别，按其性质和含量来分主要由以下几部分组成：①无机营养，包括大量元素和微量元素；②有机物质；③铁盐；④碳水化合物；⑤天然复合物；⑥激素；⑦琼脂（固体培养基）；⑧其他添加物。在培养基的配制中，对各组分的成分，常先要按其需用量扩大一定倍数，配制成母液。 MS 培养基的配制 配制培养基通常都按配方浓度的若干倍称量，配制成一系列的母液置于冰箱保存，使用时按比例稀释。一般要配下列母液： MS大量元素母液（10X） 按扩大倍数分别称取各元素溶解后定溶在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。 ?化学药品 1升量 10升量 ① NH4NO31650 mg/L16．5g ② KNO31900 mg/L19．0g ③ CaCl2·2H2O 440 mg/L4．4g ④ MgSO4·7H2O 370 mg/L3．7g ⑤ KH2PO4170 mg/L1．7g MS微量元素母液（100X） 按扩大倍数称量溶解在1000ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 ?化学药品 1升量 10升量 ① MnSO4·4H2O（ MnSO4·H2O） 22．3 mg/L（21．4 mg/L） 223mg ② ZnSO4·7H2O 8．6 mg/L86mg ③ CoCl2·6H2O 0．025mg/L0．25mg ④ CuSO4·5H2O 0．025 mg/L0．25mg ⑤ Na2MoO4·2H2O 0．25 mg/L2．5mg ⑥ KI0．83 mg/L8．3 mg ⑦ H3BO36．2 mg/L62 mg MS铁盐母液（100X） 按扩大倍数称量溶解在1000ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 化学药品 1升量 10升量 Na2·EDTA 37．3 mg/L373 mg FeSO4·7H2O 27．8 mg/L278 mg MS有机物母液（100X） 按扩大倍数称量溶解在1000ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 ?化学药品 1升量 10升量 ① 烟酸 0．5 mg/L5mg ② 盐酸吡哆素（VB6） 0．5 mg/L5mg ③ 盐酸硫胺素（VB1） ?? ④ 肌醇 100 mg/L1 g ⑤ 甘氨酸 2 mg/L20mg 2、激素母液配制 各类激素用量极微，其母液一般配制成0.1～1mg/ml。有些激素配制母液时不溶于水，需经加热或用少量稀酸、稀碱及95%酒精溶解后再