生药学教学资料（侯爱君）生药的鉴定.pptVIP

分光光度法（Spectrophotometry） —紫外分光光度法（200~400nm），定性、定量 Ultraviolet Spectrophotometry —比色法 Colourimetry （400~850nm）, 定量 —红外分光光度法 Infrared Spectrophotometry （4000~667cm-1），峰多、特征性强 结构分析 —原子吸收分光光度法，微量金属元素 Atomic Absorption Spectrophotometry —荧光光谱法 Fluorescent spectrophotometry 色谱法（Chromatography） * 原理：吸附、分配、离子交换、排阻 —纸色谱法 （PC） —薄层色谱法（TLC） —气相色谱法（GC） —高效液相色谱法（HPLC） 8 10 12 14 mAU 0 10 20 30 40 50 60 2 1 3 4 5 6 7 8 新的理化鉴别方法 —气相-质谱联用技术（GC/MS） —X-射线衍射技术 （X-Ray Diffraction） —高效毛细管电泳（HPCE） —液相-质谱联用技术（LC/MS，LC/MS/MS ） —快速液相（RRLC） —超高效液相（UPLC） · · · · · · ! 液质联用仪器 DNA分子遗传标记 (DNA 分子鉴定) (DNA Molecular Genetic Marker) —遗传稳定性 不受外界因素、发育阶段、器官组织差异影响 —遗传多样性（genetic diversity） G、A、C、T碱基排列顺序的变化导致不同物种遗传上的差异 DNA分子的不同区域有不同程度的遗传多样性：种、亚种、居群、个体 —化学稳定性，比蛋白质、同功酶稳定 在陈旧标本中保存下来的DNA仍能用于研究 DNA分子遗传标记方法 —限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP) —随机扩增多态性(random amplified polymorphic DNA, RAPD) —简单序列重复区间（inter-simple sequence repeat, ISSR） —相关序列扩增多态性( sequence-related amplified polymorphism, SRAP) —扩增片段长度多态性标记（amplified fragment length polymorphic DNA marker, AFLP） —DNA测序(DNA sequencing) 叶绿体基因rbcL、matK；核基因 rRNA、 ITS DNA提取 尽可能减少降解、避免污染 CTAB法，高盐低pH法、尿素法、试剂盒提取 PCR扩增 引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板DNA、Mg2+ 琼脂糖凝胶电泳（溴化乙锭显色） Popgene32软件计算、UPGMA 法聚类分析 多态位点百分率、观测等位基因数、有效等位基因数、Nei’s 基因多样性、Shannon’s信息指数、Nei’s遗传相似度、遗传距离…… 数据库：GenBank，EMBL DNA分子遗传标记在生药学中的应用 —植物进化、分类、鉴定，亲缘关系与分类系统 —中药材鉴别 * 人参、西洋参、三七及人参伪品 * 动物类药材：蛇类、海马 —中药质量研究：道地药材成因，优质种质资源 —中药有效成分生产：构建cDNA文库，寻找功能基因→有效成分合成基因的克隆、表达 中药材DNA条形码分子鉴定 利用基因组中一段公认的、相对较短的DNA 序列来进行物种鉴定的一种分子生物学技术 植物类中药材选用ITS2 （核糖体DNA第二内部转录间隔区）为主体序列，叶绿体psbA-trnH 为辅助序列，动物类中药材采用COI （细胞色素C氧化酶亚基I）为主体序列，ITS2 为辅助序列 核心序列选择依据：物种水平鉴定效率比较 中药材DNA 条形码鉴定系统( http: / /www. tcmbarcode. cn) 中药指纹图谱(fingerprint) * 薄层色谱法(TLC) * 高效液相色谱法(HPLC) * 气相色谱法(GC) * 高效毛细管电泳法(HPCE) “中药色谱指纹图谱相似度计算软件” 月腺大戟的UPLC指纹图谱 210nm下月腺大戟图谱分析 A：系统生成的对照图谱；B：10批月腺大戟药材的匹配图谱； S1-S10:1-10号月腺大戟样品；R：系统生成对照图谱 A B 12个共有峰； 与对照图谱的相似度范围为0.8