DNA的粗提取和鉴定(教学课件).pptVIP

* * 讨论2：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？ 讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？ 1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2、生物大分子 主要指蛋白质、酶和核酸 3、提取DNA的基本思路 利用DNA与 等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分 提取DNA的方法 RNA、蛋白质和脂质 4、原理（1）分离---DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出 4、原理 （2）提纯---DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 （2）提纯---DNA对酶、高温和洗 涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性 ③洗涤剂能够瓦解细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 5、DNA的鉴定 （1）DNA遇二苯胺（沸水浴)会被染 成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 （2）甲基绿（蓝绿色） （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 2、植物细胞 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 ②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的 和 ，进行充分的 ，过滤后收集研磨液 洗涤剂 食盐 搅拌和研磨 讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ （三）去除滤液中的杂质 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 方法步骤 加入物质 目的 1 . 制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 ① 2 . 提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水 ②幻灯片 18 3 . 溶解细胞核内的 DNA 2 m1 ／ L 的 NaCI 溶液 40 mL ③幻灯片 18 4 . 析出含 DNA 的黏稠物 蒸馏水 ④幻灯片 13 5 . 滤取含 DNA 的黏稠物 幻灯片 13⑤ 6 . 将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol ／ L 的 NaCl 溶液 20 mL 幻灯片 13⑥ 7 . 过滤含 DNA 的 NaC l 溶液 ⑦幻灯片 13 8 . 提取含有杂质较少的 DNA 冷却的 95 ％的酒精 50 mL ⑧幻灯片 13 A : (1) 向试管中加入 0 . 015 mol ／ L 的 NaCl 溶液 5 mL (2) 加入 DNA (3)4 mL 二苯胺试剂 9 . DNA 的鉴定 B : (1) 向试管中加入 0 . 015mol ／ L 的 NaCl 溶液 5 mL (2)4 m L 二苯胺试剂 ⑨ ①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出 ⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上 ⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 ⑦除去含DNA的滤液中的杂质 ⑧提取DNA ⑨ A出现蓝色 B无变化 （四） DNA的析出与鉴定 1、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g ，防止 。 2、加入 后，动作要 ，否则容易产生大量的 ，不利于后续步骤的操作。加入 和用 搅拌时，动作要轻缓，以免加剧 ，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3、二苯胺试剂要