无菌操作室.ppt

微生物实验技术（精选） 主讲：广东教育学院生物系 吴映明 E-mail: wuym88@163.com 主要内容： 一、细菌培养基的制备 培养基制备的一般过程： 二、使用家用压力锅灭菌的方法 1. 加水约1000mL，往锅内放一块纱布 2.放入待灭菌物品 3.按要求盖严锅盖4.加热至沸腾后，排净锅内空气（约3分锅） 5 . 盖上限压阀6.待锅内压强达到限压临界时，开始计时，维持30分钟 7.打开限压阀，待锅内没蒸汽喷出后取出灭菌物品 三、无菌操作室及无菌操作技术 （二）无菌操作室（或接种箱）的消毒 * * 一、细菌培养基的制备（简易培养基） 二、使用家用压力锅灭菌的方法 三、无菌操作室及无菌操作技术 四、微生物实验技术操作规范示例 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基 ：牛肉膏 3g , 蛋白胨 10g，NaCl 5g, 琼脂 15~20g，水 1000mL，pH7.4~7.6 简易培养基配方： 1.凉粉牛奶培养基配方：????????凉粉????50g????????纯牛奶????100g???????????????水????????1000mL??? pH7.4~7.6 2.牛奶(豆浆)琼脂培养基配方：????????纯牛奶(或豆浆)???100mL?????NaCl( 或食盐)???0.5g????????琼脂?????16g??????水???1000mL?????pH7.2-7.43.马蹄粉牛奶培养基：马蹄粉?50g????????纯牛奶????100g????????水????????1000mL????? pH7.4~7.6 1．称量和溶化 2.调节pH值：1N的盐酸或1N的氢氧化钠溶液调节酸碱度 3.过滤：用双层纱布。没特殊要求可不过滤。 4.分装：分装于三角瓶的，不超过其容量的一半；制备斜面培养基的，分装于试管不超过其管长的1/5。 5.加棉塞并包扎：方法见后示范 6.灭菌：121℃维持20—30分钟 7. 摆斜面或倒平板培养（将已灭菌的培养基倒入已灭菌的培养皿中） 常用高压蒸汽灭菌锅 家用压力锅 已灭菌的培养基 已接种的平板培养基 （一）无菌操作室的设计要求 1.标准接种室设计要求： （1）接种室6~8平方米，缓冲间2~3平方米，高度2~2.2米 （2）使用推拉门，室内结构要有利于清洁和消毒处理 （3）接种室和缓冲间要安装紫外灯及日光灯各一盏 单人接种箱 双人接种箱 （1）薰蒸法：每立方米空间用10毫升福尔马林（甲醛36%左右的水溶液），加入5克高锰酸钾，密闭薰蒸24小时； 甲醛挥发气穿透力极强，甲醛能与微生物细胞蛋白质的氨基结合而使之变性，对人的皮肤、眼和呼吸道有毒害和刺激作用。 残留在室内的甲醛可用氨水吸收，氨与空气中的甲醛结合，形成白色无臭粉末（乌洛托品），对人体无毒，氨的用量为甲醛的一半。