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b72单克隆抗体对狼疮样肾炎小鼠模型的免疫干预效应及分子机制分析 word格式
苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定,..即z 学位论文著作权归周苏州|太学.木学仿论文电子。文挡的内容和纸成论文的内容相一致.苏州火学有权向国家图书馆、中国丰蚓院文献倍忌f古拟中心、中国科维技术俏息研究所(含万方型i5电子陶版社〉、中留学术期刊{光盘版〉电子杂志社送交车学位论文的复印件和电子文梢,允许论文被查阅和倍阅,可以采用影印、缩印X他复:TJ手段保存和汇编学位论艾.?J以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索.也F密地义:口本学位论义;属在一一一年一-月串帘后适用水规定。非涉棺论文口4论文作者餐名2叫,导师签名z中文摘要系统性红斑狼疮(systemiclupus erythematosus,SLE)是一种由自身反应性免疫细胞异常活化后产生自身抗体为特征的疾病。病变可累及全身,造成关节、皮肤、肾脏、心脏、肺、血管等各脏器和组织不可逆的慢性破坏和功能丧失。其中狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)是SLE 最常见也是最严重的并发症,是导致患者死亡的主要原因。该病的病因至今尚无明确定论,可能与遗传及环境等多种因素有关。B7-2分子属于免疫球蛋白超家族成员之一,是抗原递呈细胞(antigen present- ingcell, APC)表面重要的协同刺激分子。其与表达于T细胞表面的CD28 结合,介导T细胞活化、增殖、分化及发挥免疫效应。缺乏该信号,T细胞将进入无反应状态(Anergy)或免疫耐受(Tolerance)甚至引起程序性细胞死亡(Apoptosis)。研究发现,B7-CD28 协同刺激信号参与了SLE 的发生发展,并发挥着重要的作用。B7分子的特异性抗体可阻断或削弱B7-CD28 信号,从而抑制免疫应答,因此通过应用B7-2 抗体阻断或削弱B7-CD28通路有望为SLE 提供新的生物治疗方法。本课题通过建立与人类SLE 疾病相似的慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样肾炎小鼠模型。运用自行研制的B7-2 单克隆抗体对疾病模型进行干预,从免疫学,血清学,肾脏组织形态学等方面的指标来考察抗体对疾病模型的逆转效应及可能的分子机制。一、B7-2 单克隆抗体的制备及鉴定目的:制备B7-2 单克隆抗体并对其进行生物学特性鉴定。方法:应用本科室成功建立的稳定分泌B7-2 单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D1,采用体内诱生腹水法制备单抗;Protein G免疫亲和层析法纯化抗体;流式细胞术分析单抗对不同细胞膜型B7-2分子的识别。结果:经体内诱生腹水法制备B7-2单抗,小鼠腹水形成阳性率约为80%,腹水收获量平均为3ml/只小鼠;经免疫亲和层析法纯化,腹水中抗体蛋白的得率为3mg/ml;单抗与转人B7-2基因小鼠成纤维细胞株L929-B7-2、Daudi 以及小鼠脾脏细胞的阳性结合率分别为99.3%、96.7%及61.2%。结论:B7-2中文摘要B7-2单克隆抗体对狼疮样肾炎小鼠模型的免疫干预效应及分子机制研究单克隆抗体能够特异性识别不同细胞膜型B7-2 分子。二、慢性移植物抗宿主病狼疮样肾炎小鼠模型的建立及病理性鉴定目的:对慢性移植物抗宿主病狼疮样肾炎小鼠模型进行免疫学、血清学及肾脏病理损伤鉴定。以考察该模型作为SLE疾病模型的可靠性。方法:将亲代雌性BALB/c小鼠脾脏细胞悬液经尾静脉注射( C57BL/ J6×BALB/ c) F1代小鼠,每隔3 天注射1次,共4次。建模后1周,采用免疫荧光及流式细胞仪分析小鼠脾脏中抗原提呈细胞(APC)及抗体形成细胞的百分率。每隔2 周检测血清中anti-dsDNA 抗体及ANA;每隔4周检测尿蛋白量的动态变化;建模12 周终止实验,取肾脏组织作HE染色观察病理改变,直接免疫荧光法检测免疫复合物(IC)沉积以及透射电镜观察肾小球超微结构变化。结果:流式细胞术的分析结果显示,造模后1周脾脏中膜型CD11b+、CD11c+及GR1+细胞的百分率较对照组明显升高(P0.05),同时抗体形成细胞B220+表面CD21、CD23、CD80及CD86分子的表达均上调(P0.05);建模2 周时,血清anti-dsDNA抗体出现阳性,4 周时ANA 出现阳性;12周时80%的小鼠存在蛋白尿,蛋白含量++~++++;肾小球体积增大并有大量炎性细胞浸润;肾脏IC沉积;透射电镜下可见肾基底膜节段性增厚,脏层上皮细胞和基底膜之间存在大量的电子致密物。结论:慢性移植物抗宿主病狼疮样肾炎小鼠模型具有人类SLE相似的免疫细胞异常活化及肾脏病理损伤的特征性表现,用于相关研究具有可靠性。三、B7-2单克隆抗体对狼疮样肾炎小鼠模型的免疫干预效应及分子机制的研究目的:探讨B7-2 单克隆抗体通过阻断或削弱B7/CD28 信号通路对狼疮样肾炎小鼠模型的免疫干预效应
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