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e3泛素化连接酶chip在胃癌发生发展中的作用及机制分析 word格式
苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定,即z 学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所〈含万方数据电子出版社〉、中国学术期刊(光盘版〉电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口V本学位论文属在一一一年一一月解密后适用本规定。非涉密论文论文作者签名z主4哨导师签名z日期:;;}o1}.3.川日期:).()t.f.♂.WE3泛素化连接酶CHIP在胃癌发生发展中的作用及机制研究中文摘要目的本研究试图阐明E3泛素化连接酶CHIP在胃癌细胞株AGS细胞中的作用以及探讨其潜在的生物学机制。方法应用qRT-PCR、Westernblot以及IHC等方法检测胃癌组织中CHIP的表达情况。采用慢病毒感染宿主细胞的方法转染MSCV-GFP-hCHIP质粒并建立稳定高表达CHIP的胃癌细胞株AGS-hCHIP。通过xCELLigence系统实时动态观察CHIP 高表达后细胞生长、细胞迁移以及细胞侵袭能力的变化。应用流式细胞术检测CHIP 高表达后细胞周期的变化。采用Ki-67染色法以及TUNEL法检测CHIP高表达后细胞增殖以及细胞凋亡的变化。通过细胞划痕实验观察CHIP高表达后细胞迁移能力的变化。采用明胶酶谱MMP活性检测方法检测CHIP高表达后细胞内金属蛋白酶活性的变化。应用qRT-PCR 及Westernblot技术检测相关基因在mRNA水平以及蛋白水平的表达。通过Westernblot技术检测CHIP高表达后对细胞内AKT 信号通路相关蛋白以及TRAF-NF-κB信号通路相关家族成员蛋白水平的表达。结果胃癌组织中CHIP在mRNA水平以及蛋白质水平的表达均较正常组织呈相对低表达,且CHIP的表达量与胃癌的分化程度及TNM分期有显著统计学差异(P0.05)。在胃癌细胞株AGS中分别稳定转染MSCV-GFP-hCHIP质粒和MSCV-GFP 质粒,成功获得实验组稳定高表达CHIP的AGS-hCHIP细胞和对照组AGS-control细胞。AGS-hCHIP 细胞的生长速度明显慢于AGS-control细胞,并且迁移、侵袭能力均较AGS-control 细胞显著减弱。AGS-hCHIP 细胞与AGS-control 细胞在细胞周期上无明显差异。AGS-hCHIP细胞的增殖能力较AGS-control细胞显著减弱。AGS-hCHIP 细胞的凋亡细胞百分比较AGS-control细胞明显增多。AGS-hCHIP细胞中ITGB1基因在mRNA和蛋白质水平的表达均较AGS-control细胞显著下调。AGS-hCHIP细胞中的MMP-2、MMP-9蛋白质水平的表达均较AGS-control细胞显著下调,同时明胶酶谱MMP活性检测方法检测显示AGS-hCHIP细胞中MMP-2和MMP-9的表达显著I中文摘要E3泛素化连接酶CHIP在胃癌发生发展中的作用及机制研究低于AGS-control 细胞。AGS-hCHIP细胞中Bcl-2 基因在mRNA和蛋白质水平的表达均较AGS-control 细胞明显下调,其余相关基因Bcl-xl、cIAP1、Bax、A20、Bim、Mcl-1 在mRNA水平的表达无明显变化。AGS-hCHIP细胞中pAKT(Ser473)及pAKT(Thr308) 的蛋白表达水平较AGS-control细胞呈明显下调。AGS-hCHIP细胞中RelA、p50、RelB及TRAF-2的蛋白表达水平较AGS-control 细胞显著下调。结论CHIP在胃癌的发生发展中扮演着抑癌基因的角色,可以作为判断胃癌侵袭、转移以及患者预后的参考指标。在胃癌细胞株AGS细胞中高表达CHIP能显著抑制细胞的生长、迁移以及侵袭等恶性生物学行为。高表达CHIP显著抑制了胃癌细胞株AGS细胞的生长,与细胞增殖能力减弱及细胞凋亡增多相关,Bcl-2基因的下调及AKT 信号通路活性的抑制可能是其潜在的原因。高表达CHIP 显著抑制了AGS 胃癌细胞株中TRAF-2-NF-κB信号通路的活性,导致了NF-κB信号通路下游一系列靶基因如ITGB1、MMP-2及MMP-9表达水平的下调,这可能是CHIP抑制胃癌细胞恶性生物学行为的重要机制之一。CHIP有望作为胃癌分子靶向治疗的新靶点,应用CHIP高表达技术可以成为一种潜在的胃癌基因治疗的手段。【关键词】胃癌;CHIP;NF-κB;细胞生长;细胞迁移;细胞侵袭作者:刘菲指导教师:陈卫昌教授TheroleofE3ubiquitin
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