egr1反义寡核苷酸对大鼠心肌细胞egr1蛋白表达及缺氧复氧损伤的影响 word格式.docxVIP

结果：1、荧光标记的 AS-ODN 在心肌细胞的转染效果： FITC 标记的 AS-ODN 在 488nm 的激 发光源下呈现绿色。荧光显微镜下绿色荧光的位置与同一视野下细胞所在位置相一致， 说明 AS-ODN 成功转染进入心肌细胞。（图 1-3）2、Egr-1 在各组中的蛋白表达分析：与 H/R 组比较，N 组 Egr-1 蛋白表达明显较弱，差别 有统计学意义(p＜0.01),LIP 组、S 组、Sc 组无明显差异（p＞0.05），而 AS 组 Egr-1 蛋 白表达明显减少，差别有统计学意义（p＜0.01）。（图 1-4）3、各组心肌细胞分泌 TNF-α水平比较：与 N 组相比，H/R 组、LIP 组、S 组、Sc 组心肌 细胞分泌的 TNF-α水平明显升高，差异有统计学意义(p＜0.01)；而 H/R 组与 LIP 组、 S 组和 Sc 组之间比较差异无统计学意义（p＞0.05）；AS 组与 H/R 组相比，TNF-α分泌 量下降，差异有统计学意义(p＜0.01)。(表 1-1)结论：在心肌细胞 H/R 条件下, Egr-1 对于炎症发应的发生起到了一定的作用。应用AS-ODN 能够抑制心肌细胞 H/R 过程中 Egr-1 的蛋白表达和细胞的炎症反应。二、Egr-1 AS-ODN 对 H/R 心肌细胞损伤的保护作用各组心肌细胞做相应的处理后，利用倒置显微镜观察心肌细胞的生长状态和搏动频 率。取细胞培养液，按照试剂盒说明测定乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性及肌钙蛋 白（cTnI）含量。收集心肌细胞，超声粉碎，离心取上清，按照试剂盒说明，硫代巴比妥 酸法测定丙二醛(MDA)含量，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性。用酶消化 制成细胞悬液，台盼蓝染色法检测心肌细胞存活率。结果：1、各组心肌细胞形态学观察：心肌细胞培养 12-24h 出现自发性搏动,72h 后聚集成簇,呈现 频率为 80-100 次/分的同步节律性搏动。细胞形态呈梭形或不规则三角形，伪足明显， 可发生相互融合。H/R 后心肌细胞皱缩变圆，伪足减少，缺氧 3h 细胞搏幅减弱、频率 减慢甚至出现停搏。复氧 1h 后部分可恢复搏动，但出现节律失常现象。AS 组细胞形态 变化小于 H/R 组, 搏动状态有所改善。但 LIP 组、S 组及 Sc 组 H/R 后形态及搏动状态 无明显改善。2、各组心肌细胞培养液中 LDH、CK 活性和 cTnI 含量的比较：与 N 组相比，其余各组 培养基中 LDH、CK、cTnI 的漏出量均增高，差异有统计学意义(p＜0.01)；而 H/R 组 与 LIP 组、S 组和 Sc 组之间比较差异则无统计学意义（p＞0.05）；AS 组与 H/R 组、LIP组、S 组、Sc 组相比，LDH、CK、cTnI 的漏出量明显降低，差异有统计学意义(p＜0.01)。(表 2-1)3、各组心肌细胞 SOD 活性和 MDA 含量的比较：与 N 组相比，其余各组心肌细胞内 MDA 含量明显增高，SOD 活力明显降低，差异有统计学意义(p＜0.01)；而 H/R 组与 LIP 组、 S 组和 Sc 组之间比较差异无统计学意义（p＞0.05）；AS 组与 H/R 组、LIP 组、S 组、 Sc 组相比，MDA 含量降低，SOD 活力明显提高，差异有统计学意义(p＜0.01)。(表 2-2)4、各组心肌细胞存活率比较：与 N 组相比，其余各组心肌细胞存活率均降低，差异有统 计学意义(p＜0.01)；而 H/R 组与 LIP 组、S 组和 Sc 组之间比较差异无统计学意义（p＞0.05）；AS 组与 H/R 组、LIP 组、S 组、Sc 组相比，心肌细胞存活率明显升高，差异 有统计学意义(p＜0.01)。（表 2-3）结论：Egr-1 在心肌细胞 H/R 损伤的发生与发展过程中发挥了重要作用，而应用 Egr-1 AS-ODN 能够减弱心肌细胞的 H/R 损伤，提高心肌细胞的存活率，保护心肌细胞 功能。关键词：心肌细胞；缺氧/复氧损伤；早期生长反应因子-1；反义寡核苷酸； 肿瘤坏死因子-αEffects of Egr-1 antisense oligodeoxynucleotide on Egr-1 expression and cardiomyocytes Hypoxia-reoxygenation injuryMaster CandidateGAO PingSupervisorProf. SHI Gang-GangABSTRACTThe research about myocardial ischemia-reperfusion(I/R) injury is an important area incardiology. Many li