evn50对人视网膜母细胞瘤细胞生长和凋亡作用影响 word格式.docxVIP

中文摘要目的研究黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)抑制体外培养人视网膜母细胞瘤细胞（RB细胞）生长作用以及诱导RB细胞凋亡作用，为开发和研制临床治疗人视网膜母细胞瘤候选药物提供实验和理论依据。方法体外培养RB细胞；MTT比色法测定EVn-50对RB细胞增殖活性的影响；细胞计数法检测RB细胞存活率，绘制生长曲线；软琼脂集落形成法测定EVn-50 抑制体外培养RB细胞的锚定非依赖性生长作用；PI染色流式细胞术（FCM）定量分析EVn-50诱导RB细胞凋亡程度；AO/EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导RB细胞凋亡的形态学改变；DNA琼脂糖凝胶电泳确证EVn-50诱导RB细胞凋亡作用。结果MTT比色法测定结果显示：EVn-50 可作为黄荆子抗RB的有效提取物。EVn-50对RB细胞增殖活性抑制作用强，并呈浓度依赖性，其IC50为9.60μg/ml；细胞计数结果表明：0.3、3.0、30.0μg/ml的EVn-50均具有抑制RB细胞生长作用，呈浓度和时间依赖性；软琼脂集落形成法的结果表明：EVn-50 对RB细胞锚定非依赖性生长具有明显的抑制作用，并呈浓度依赖性。PI染色流式细胞术分析的量效实验结果发现：0.3、3.0、30.0μg/ml 的EVn-50 作用于RB 细胞48 小时后的细胞凋亡率分别是(2.4±0.1)％、(17.4±0.6)％、(40.7±0.7)%；而时效实验中30.0μg/ml的EVn-50作用于RB细胞24、48、72小时后的细胞凋亡率分别是(20.8±0.4)％、(40.7±0.7)％、(63.1±0.8)%；远高于空白对照组的凋亡率(0.8±0.3)%。表明：EVn-50诱导RB细胞凋亡，并呈浓度和时间依赖性。AO/EB染色荧光显微镜观察EVn-50处理后，部分RB细胞呈现胞质和胞核呈红色，核固缩或碎裂的典型凋亡细胞形态特征。EVn-50 0.3μg/ml、3.0μg/ml、30.0μg/ml分别处理RB 细胞48 小时，以及EVn-5030.0μg/ml 分别作用RB细胞0、24、48 和72h 琼脂糖凝胶电泳出现典型―梯形‖DNA 条带。结论1.EVn-50 抑制体外培养人视网膜母细胞瘤细胞RB细胞生长，呈浓度和时间依赖性；EVn-50 是黄荆子抗人视网膜母细胞瘤作用的有效提取物。2.EVn-50有效诱导人视网膜母细胞瘤RB细胞凋亡，呈浓度和时间依赖性。关键词人视网膜母细胞瘤；黄荆子；黄荆子乙酸乙酯提取物；治疗作用EffectsoftheAcetoacetateExtractoftheVitexNegundoSeedsEVn-50onInhibitionofGrowthandInductionofApoptosisinHumanRetioblastomaCellsAbstractObjectiveToscreentheAcetoacetateextractionofVitexNegundoSeedsagainsthuman Retioblastoma,andinvestigatetheAcetoacetateextractionofVitexNegundoSeeds (EVn-50)induceinhibitionofgrowthinduceapoptosisinRBcells,andevaluatethe efficacyforRetioblastomatherapybyEVn-50invitro,inordertoprovidea laboratoryandtheoreticevidenceforsearchingforanewpotentandpromising candidateforRetioblastoma chemotherapy.MethodsHumanretioblastomacellswereculturedinvitro.Then,MTTassaywasusedto determinetheeffectoftheAcetoacetateextractionofVitexNegundoSeed(EVn-50) ontheproliferationofRBcells.TheinhibitionofthegrowthbyEVn-50inRBcells wasusedtotestbythecellcountingaftertrypanbluestaining.Colonyformation assayinsoftagarwasusedtodetectthecolonyformationinhibitoryeffectofonRB cells.Flowcytometry(FCM)usingPIstainingwasusedtoanalysetheapoptosisrate treat