除虫菊素Pyrethrins酶联免疫分析ELISA.PDF

除虫菊素(Pyrethrins)酶联免疫分析 （ELISA ） 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 1 使用目的： 本试剂盒用于蔬菜、水果、相应食物、水及中毒残留物中除虫菊素(Pyrethrins)残留的定 量检测。 2 实验原理 本试剂盒采用竞争 ELISA 方法，在微孔板包被有除虫菊素(Pyrethrins)偶联抗原，加入 除虫菊素(Pyrethrins)标准品或样品，游离除虫菊素(Pyrethrins)与微孔条上预包被的拟除虫菊 酯(Pyrethroids)偶联抗原互相竞争抗除虫菊素(Pyrethrins)抗体酶标记物，用 TMB 底物显色， 加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在 450nm 波长下进行检测，吸光值与样品中 除虫菊素(Pyrethrins)含量成反比，通过标准曲线计算样品中除虫菊素(Pyrethrins)的含量。 3 试剂盒组成 3.1 预包被的除虫菊素(Pyrethrins)偶联抗原的可拆酶标板：1 块 （12 孔×8 条）。 3.2 除 虫 菊 素 (Pyrethrins) 标 准 品 ： 6 瓶 （1ml/ 瓶 ）， 含 量 分 别 是 ： 0ng/ml, 0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml 。 3.3 抗除虫菊素(Pyrethrins)抗体酶结合物：1 瓶 （6ml ）。 3.4 显色液 A ：1 瓶 （6ml ）。 3.5 显色液 B ：1 瓶 （6ml ）。 3.6 终止液：1 瓶 （6ml ），2M 硫酸。 3.7 样本稀释液：1 瓶 （10×, 6ml ），用于样品稀释用。 3.8 浓缩洗涤液：1 瓶 （20×，20ml ），用于洗板。 3.9 说明书一份。 4 需要而未提供的材料 4.1 设备 4.1.1波长450nm酶标仪。 4.1.2粉碎机。 4.1.3量筒。 4.1.4振荡器。 4.1.5漏斗。 4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。 4.1.7微量移液器。 4.2 试剂 4.2.1去离子水或蒸馏水。 4.2.2 甲醇。 5 贮存 5.1 试剂盒贮存于2~8 ℃，切勿冷冻 5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存 6 注意事项 6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。 1 6.2 不要使用过期试剂盒。 6.3 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温 （25±2℃），建议至少回温2小时。 6.4 标准品中含有除虫菊素(Pyrethrins)，使用时应特别注意，操作时应带手套。 6.5 终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。 6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。 6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响 实验结果。 6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果 6.9 混合试剂时应避免起泡。 7 工作液准备 7.1 除虫菊素(Pyrethrins)标准品溶液：0ng/ml, 0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml 7.2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20(1+ 19)稀释备用 7.3 样本稀释液：用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用 7.3 显色剂：已备用，避免光线直照 7.4 反应终止液：已备用 8 样品处理程序 （样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则 会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存） 8.1取10g粉碎的样品，加 20ml 70% 甲醇溶液 8.2强力振荡3分钟 8.3用Whatman No 1滤纸过滤 8.4取25µl处理后的样品，加入25µl样本稀释液于反应孔中 （样本稀释倍数为2 ） 9 酶免分析步骤 9.1 实验须知 9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温 （25±2 ℃），时间约2小时。回温至室 温 （25±2 ℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8 ℃干燥保存 注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。 9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存 9.1.3 请不要改变分析程序 9.1.4 请使用精确的微量移液器 9.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序 9.1.6 ELISA结果的