多相催化动力学教程.pptVIP

或 例： 在含有相同酶浓度的五个反应物系中，分别加入不同浓度的底物，并测定其初始速率，然后再在同样五个反应物系中分别加入浓度为2.2×10-1mmol／L的抑制剂，并测其初始的反应速率，其数据见下表。 解 以L—B作图法来判断抑制类型并求其参数。 据此上述实验数据分别取其例数，以l／rSI对1／Cs做图，得到如图所示两条直线，它们在纵轴有一共点交点，这表明该抑制为竞争性抑制。 一、可逆酶反应动力学 Kmp和Km分别为正、逆反应米氏常数；rP,max rs,max分别为正逆反应的最大速率 4.4.4 复杂的酶催化反应动力学 反应的净速率式 若令： 式中 Ke一一反应平衡常数 产物抑制系指当产物与酶形成复合物EP后，就停止继续进行反应的情况，特别是当产物浓度较高时有可能出现这种抑制。 其反应机理 所生成EP为无活性的端点复合物 应用稳态法推导得出如下反应速率方程式 二、产物抑制的酶反应动力学 （1）随机机制 两个底物S1和S2随机地与酶结合，产物P1和P2也随机地释放出来。 其机理可表示为 三、 多底物酶反应动力学 式中:Cs1和Cs2分别为底物sl与s2的浓度，K1、K3、K4分别为相应各步的解离常数 （2） 顺序机制 两个底物Sl和s2与酶结合成复合物是有顺序的，酶先与底物s1结合形成〔Es1〕复合物，然后该复合物Esl再与s 2结合形成具有催化活性的[ES1S2]。 按同样推导方法求出下述方程式： 式中:Cs1和Cs2分别为底物sl与s2的浓度，K1、K3、K4分别为相应各步的解离常数。 一、Michaelis-Menten 方程 方程推导三点假设： ①与底物浓度CS相比，酶的浓度CI是很小的，因而可忽略由于生成中间复合物[ES]而消耗的底物。 ②在反应过程中，酶浓度保持恒定。CE0＝CE＋CES ③产物的浓度很低，因而产物的抑制作用可以忽略。生成产物一步的速率要慢于底物与酶生成复合物的可逆反应的速率，因此，生成产物一步的速率决定整个酶的催化反应速率，而生成复合物的可逆反应达到平衡状态。 G．E．Briggs和B．J．Haldane对上述第3点假设进行了修正，提出了“拟稳态”假设。 由于反应体系中底物浓度要比酶的浓度高得多，中间复合物分解时所得到的酶又立即与底物相结合，从而使反应体系中复合物浓度维持不变，即中间复合物的浓度不再随时间而变化，这就是“拟稳态”假设。这是从反应机理推导动力学方程又一重要假设。 二、Briggs－Haldane 方程 三、动力学特征与参数求解 rs~Cs的三个不同动力学特点的区域： 1. 当Cs＜＜Km，即底物浓度比Km值小得很多时，该曲线近似为一直线。这表示反应速率与底物浓度近似成正比的关系，此时酶催化反应可近似看作为一级反应： 式中Cs0——底物的初始浓度，Mol／L 2. 当Cs＞＞Km时，该曲线近似为一水平线，表示当底物浓度继续增加时，反应速率变化不大。此时酶催化反应可视为零级反应，反应速率将不随底物浓度的变化而变化。这是因为当Km值很小时，绝大多数酶呈复合物状态，反应体系内游离的酶很少，因而即使提高底物的浓度，也不能提高其反应速率。 3.　当Cs与Km的数量关系处于上述两者之间的范围时，则符合M- M方程所表示的关系式。 参数求解： (1)??? Lineweaver—Burk法(简称L—B法)。将M—M方程取其倒数得到下式: （2）Hanes—Woolf法(简称H—W法)。两边均乘以Cs，得到 （3）Eadie—Hofstee法(简称E—H法)。将M—M方程重排为 （4）积分法 4.4.3　有抑制的酶催化反应动力学 ? 在酶催化反应中，由于某些外源化合物的存在而使反应速率下降，这种物质称为抑制剂。 抑制作用分为可逆抑制与不可逆抑制两大类。 如果某种抑制可用诸如透析等物理方法把抑制剂去掉而恢复酶的活性，则此类抑制称为可逆抑制，此时酶与抑制剂的结合存在着解离平衡的关系。 如果抑制剂与酶的基因成共价结合，则此时不能用物理方法去掉抑制剂。此类抑制可使酶永久性地失活。例如重金属离子Hg2+”、Pb2+”等对木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶的抑制都是不可逆抑制。 一、竞争性抑制动力学 若在反应体系中存在有与底物结构相类似的物质，该物质也能在酶的活性部位上结合，从而阻碍了酶与底物的结合，使酶催化底物的反应速率下降。这种抑制称为竞争性抑制，该物质称为竞争性抑制剂。其主要特点是，抑制剂与底物竞争酶的活性部位，当抑制剂与酶的活性部位结合之后，底物就不能再与酶结合，反之亦然。在琥珀酸脱氢酶催化琥珀