趋化因子受体cxcr4在恶性胶质瘤侵袭和血管生成中的作用研究-病理学与病理生理学专业论文 word格式.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 第三军医大学 博士学位论文 趋化因子受体CXCR4在恶性胶质瘤侵袭和血管生成中的作用研究 姓名：杨世昕 申请学位级别：博士 专业：病理学与病理生理学 指导教师：卞修武第三军医大学博士学位论文 第三军医大学博士学位论文 PAGE PAGE 5 趋化因子受体 CXCR4 在人恶性胶质瘤侵袭 和血管生成中的作用研究1 摘 要 已有研究显示 趋化因子及其受体在肿瘤的发生和发展过程中发挥着重要而复杂 的作用 有些趋化因子与其受体结合后促进肿瘤细胞增殖 引起肿瘤细胞与内皮细胞 发生移动 加速肿瘤细胞的扩散和转移以及肿瘤血管生成 而有的趋化因子与其受体 结合后抑制肿瘤细胞生长和血管生成 激发机体特异性和非特异性免疫应答 抑制肿 瘤的转移 因此 从趋化因子及其受体的角度来研究人肿瘤侵袭和血管生成的机制 对认识肿瘤发生 发展的机理和肿瘤抗血管生成治疗 具有十分重要的意义 为了探讨 CXCR4 在胶质瘤侵袭和血管生成中的可能作用与机制 本课题从以下四 个方面进行了研究 对三种胶质瘤细胞系 U87-MG SHG-44 CHG-5 分化程度进行 了比较 分别检测了以上胶质瘤细胞以及血管内皮样细胞 ECV304 趋化因子受体 CXCR4 基因和蛋白的表达 并对人胶质瘤组织 CXCR4 的表达特征进行了观测 检 测了 CXCR4 在以上三种胶质瘤细胞以及 ECV304 细胞自发运动和趋化运动中的作用 检测了 CXCR4 与其配体 SDF1 结合后胶质瘤细胞系以及 ECV304 细胞钙动员和 VEGF 表达的情况 检测了化合物诺帝处理对 U87-MG SHG-44 CHG-5 和 ECV304 细胞生长的影响 检测诺帝处理对以上细胞 CXCR4 表达的影响 检测诺帝处理对以 上细胞自发运动和趋化运动的影响 检测诺帝处理对以上细胞[Ca2+]i 的影响 主要结 果和结论如下 1. 采用免疫细胞化学检测了三种胶质瘤细胞系中 vimentin GFAP 表达 结果显 示 (1)vimentin 在 U87-MG SHG-44 CHG-5 细胞存在差异表达, U87-MG 表达最强 而 CHG-5 表达最弱 (2)GFAP 在 U87-MG SHG-44 CHG-5 存在差异表达 CHG-5 表达最强 而 U87-MG 表达最弱 以上结果提示 三种人脑胶质瘤细胞系的恶性程度 存在差异 其中 U87-MG 分化程度最低恶性程度最高 SHG-44 其次 CHG-5 分化程 度最高恶性程度最低 1 本课题受国际抗癌联盟(UICC)资助 资助编号 No.661/2002 2. 采用 RT-PCR 方法检测了三种胶质瘤细胞系细胞和血管内皮样细胞系 ECV304 细胞几种趋化因子受体基因表达 结果显示 CXCR4 mRNA 在这些细胞呈高表达 CCR2 CXCR2 CXCR1mRNA 呈低表达 免疫细胞化学方法验证比较了三种胶质瘤 细胞系均存在 CXCR4 的表达 发现 SHG-44 细胞中 CXCR4 表达比 U87 细胞表达弱 但比 CHG-5 表达强 ECV304 细胞 CXCR4 表达阳性 提示 CXCR4 可能是胶质瘤细 胞和血管内皮细胞中一种重要受体 3. 采用免疫组织化学方法检测了人脑胶质瘤组织 CXCR4 的表达情况 胶质瘤瘤 细胞存在 CXCR4 表达 随肿瘤级别增高 表达增强 胶质瘤中的血管内皮细胞也存 在 CXCR4 表达 结果提示胶质瘤中 CXCR4 表达可能与胶质瘤恶性程度 血管生成和 侵袭存在密切关系 4. 采用细胞随机迁移和 SDF1 诱导的趋化实验模型检测了三种胶质瘤细胞和 ECV304 细胞的运动活性和迁移能力 SDF1 不仅能够增强胶质瘤细胞和血管内皮样细 胞自发运动的能力 而且能够诱导三种胶质瘤细胞和血管内皮样细胞发生趋化运动 而 CXCR4 抗体能够特异抑制 SDF1 诱导三种胶质瘤细胞和血管内皮样细胞的趋化迁 移 结果提示 SDF1 与其受体 CXCR4 结合后引起瘤细胞和内皮细胞迁移可能是胶质 瘤侵袭和血管生成发生的主要机理之一 5. 采用激光共聚焦显微术和免疫细胞染色方法分别对 SDF1 激活 CXCR4 后胶质 瘤细胞和血管内皮样细胞[Ca2+]i 变化和 VEGF 表达的影响进行检测 结果显示 SDF1 刺激这些细胞后[Ca2+]i 明显升高 细胞 VEGF 表达增强 提示胶质瘤细胞 血管内皮 细胞高表达 CXCR4 是功能性的 与其唯一配体 SDF1 结合后会引起以上细胞 VEGF 表达升高 这可能是胶质瘤快速增殖和血管生成的分子基础 6. 化合物诺帝处理胶质瘤细胞系和血管内皮细胞 对三种胶质瘤细胞和 ECV304 细胞的生长均有抑制作