核酸的提取教学教案.ppt

RNA 2.消除Rnase的活性方法： （1）对于外源Rnase： 器皿和材料 塑料器皿（如离心管、Tip头、eppendorf管） 其它不能用高温烤的材料。 DEPC（焦碳酸二乙酯）： 0.1%DEPC水37℃浸泡2小时以上，并经高压灭菌； 碘乙酸水溶液 氯仿 RNA 玻璃器皿： 200℃干烤6-12 h 器皿和材料 RNA 加入DEPC至 0.1%浓度 然后剧烈振荡20min或室温过夜 ? 煮沸15min或高压灭菌以消除残余的DEPC 试 剂 ① 否则DEPC与腺嘌呤作用而破坏mRNA活性。 DEPC是Rnase的化学修饰剂，它与Rnase的活性基团组氨酸咪唑环反应而抑制Rnase的活性。 RNA （2）对于内源Rnase： 根据实验特点采用不同方法： 如体外转录等实验中加入Rnase的专一抑制剂(Rnasin)： 对于RNA的分离制备可采用非特异的蛋白变性剂、蛋白酶K、阴离子去污剂。 二、实验原理 细胞内RNA均与蛋白质结合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。 制备RNA时，必须使RNA与蛋白解离，并除去蛋白质。 由于RNA的种类来源和存在形式不同，所用的制备方法各异，一般常用的方法有，盐酸胍法，去污剂法和苯酚法。 异硫氰酸胍/苯酚法（Trizol法）原理 裂解细胞：细胞在变性剂异硫氰酸胍的作用下