血清白球蛋白的分离、纯化及鉴定试验用 课件.pptVIP

离子交换色谱（ion exchange chromatography） 以离子交换剂为固定相，利用样品中不同的生物大分子的带电部分与具有相反电荷的离子交换剂吸附强弱不同，而将混合物中的不同离子进行分离的色谱技术。 三、纯化（离子交换色谱法） 阳离子交换剂（cation exchanger） 两种离子交换剂 阴离子交换剂（anion exchanger） R-SO3－H+ + Na+←→R-S O3 Na+ + H+ R-NH4＋ OH－+Cl－←→R-NH4+ Cl－+OH－ 离子交换剂的化学成分 1、树脂类：分离氨基酸，孔径小； 2、纤维素类：分离蛋白质，孔径大。 通过改变盐浓度，辅助改变pH值进行梯度洗脱。 阳离子交换基 强酸性，聚苯乙烯树脂 弱酸性，羧甲基纤维素 弱酸性，螯合作用，聚苯乙烯树脂 阴离子交换基 强碱性，聚苯乙烯树脂 弱碱性，二乙氨乙基纤维素 阳离子交换层析过程 离子交换树脂 蛋白质 高离子强度洗脱液洗 高离子强度洗脱液洗 加样 平衡液洗 收集 球蛋白中： α及β球蛋白的pI＜6.5，带负电 而γ球蛋白的pI＞6.5(pI7.3) ，带正电 γ球蛋白先洗脱出来。 白蛋白中： α、β及白蛋白均带负电，挂于柱上 先用低盐洗去α、β球蛋白 再用高盐竞争洗下白蛋白 DEAE纤维素阴离子交