蛋白质分离纯化教程文件.pptVIP

;①产物大多处于细胞内, 提取前需将细胞破碎, 增加了很多困难; ②产物浓度较低、杂质多, 而最后成品要求达到的纯度高, 故提取较困难, 且收率低, 常需好几步操作并需采用高分辨力的精制方法; ③产物都是大分子蛋白质, 通常不稳定, 遇热、极端pH、有机溶剂和剪切力等易引起失活。; 1 蛋白质的分离方法;（3）以溶解度变化为依据：改变pH、改变离子强度、降低介电常数 （4）以特异性结合位置为依据：亲和色谱、亲和洗提 （5）其它方法：热变性、在磷酸钙凝胶柱上分级吸附、羟基磷灰石色谱、疏水色谱、用水溶性的非离子聚合物（聚乙二醇）沉淀、冷冻干燥浓缩;(1) 以大小或质量为依据; 1.1 离心; 高速离心 速度一般在20,000 g以下。 超离心 相对离心力场速度在75,000 g以上，在80,000~250,000 g 之间。利用物质密度的不同，经超速离心后，分布于不同的液层而分离。 1. 主要分离小分子量酶。 2. 超速离心也可用来测定蛋白质的分子量，蛋白质的分子量与其沉降系数S成正比。 ;;葡聚糖凝胶操作流程： 1）选择 根据分子量大小范围选择凝胶。 凝胶 如:G50排阻1,500-30,000 （Sephadex）