SDS、PAGE.pptVIP

SDSSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 一.实验目的 了解电泳实验原理。 掌握垂直板电泳的操作方法。 二.实验原理 聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂四甲基乙二胺(TEMED)和引发剂过硫酸铵(AP) 的作用下聚合交联而成的三维网状结构的凝胶。以此凝胶作为支持介质的电泳称为PAGE。 PAGE具有电泳和分子筛的双重作用。 PAGE分为连续系统和不连续系统两大类。不连续系统具有电荷效应、分子筛效应和浓缩效应 蛋白质分子结合SDS阴离子后，所带负电荷的量远远超过了它原有的净电荷，从而消除了不同种蛋白质之间所带净电荷的差异。蛋白质的电泳迁移率主要决定于亚基的相对分子质量。而与其所带电荷的性质无关。 三.操作步骤 制胶 试剂(ml) 10%分离胶 5%浓缩胶 ddH2O 6 5.5 30%储备胶 5 1.3 1.5M Tris-HCl 3.75 1M Tris-HCl 1 10% SDS 0.15 0.08 TEMED 30ul 16ul 10% AP 0.15(临用前加) 0.08(临用前加) 总体积 15 8 上样：取10ul处理后的样品加入样品孔中，并加入5ul蛋白标准品作对照。 电泳：在电泳槽中加入1×电泳缓冲液，连接电源，负极在上，正极在下，电泳时，浓缩胶电压100V，分离胶电压150V，电泳至溴酚兰(指示停止电泳)