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阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 * 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 二、单克隆抗体 1、 抗体是由什么细胞产生的?它有何作用? 抗体 2、 抗体传统方法制备： ①方法： ②缺点： 向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从血清中分离所需抗体。 产量低、纯度低、特异性差 “导学案”合作探究 2、制备单克隆抗体时，为什么要选用效应B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ 小鼠的B淋巴细胞 杂交瘤细胞 融合 小鼠的骨髓瘤细胞 克隆 产生大量的杂交瘤细胞，获得大量的单一抗体。 特点：具有两个亲本细胞的遗传特性 如何使小鼠体内产生分泌某种特定抗体的B淋巴细胞？ B淋巴细胞 反复注射特定的抗原蛋白 从脾脏处提取 未受抗原刺激、 受已知抗原刺激、 受未知抗原刺激 3、单克隆抗体的制备 如何诱导两种细胞融合，获得杂交瘤细胞？ 方法 原理 结果 动物细胞融合 ○化学方法：聚乙二醇 ○物理方法：电激 ○生物方法：灭活的病毒 细胞膜的流动性 杂交细胞 如何筛选出杂交瘤细胞？ ①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。 ③（选择缺陷型）鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。 你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？ 小资料： 选择培养基 杂交瘤细胞 第一次筛选目的：筛选出杂交瘤细胞 （含氨基喋呤） B细胞 瘤细胞 B-B细胞 瘤-瘤细胞 杂交瘤细胞 筛选出的杂交瘤细胞可能有几种情况？ 如何筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞？ 未受抗原刺激的B-瘤细胞（不能分泌抗体） 受已知抗原刺激的B-瘤细胞（能分泌所需的抗体） 受未知抗原刺激的B-瘤细胞（分泌不需要的抗体） 方法—— 抗原-抗体杂交法 通常采用有限稀释法，将筛选出来的杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不多于一个，再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。 再筛选目的：筛选分泌所需抗体的杂交瘤细胞 阳性孔 抗原抗体杂交法检测——呈阳性反应 思考： 呈阳性反应是否说明单孔内的细胞是否来自单个细胞？ 如何克隆杂交瘤细胞？ 产生特定抗体的杂交瘤细胞 体外培养 从培养液中提取抗体 从腹水中提取抗体 体内培养 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 * 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 1.怎样获得能够产生抗体的B淋巴细胞？ 2.骨髓瘤细胞具有什么特性？ 3.科学家期望杂交瘤细胞有怎样的性状？ 4.细胞融合有哪几种情况发生？怎样筛选出杂交瘤细胞？ 5.杂交瘤细胞在体外培养要用到那种细胞工程技术？