经典免疫学技术课件.pptVIP

第八章 经典免疫学技术 2 经典免疫学技术主要包括 沉淀反应 凝集反应 免疫球蛋白测定 补体介导的溶解技术 3 抗原抗体反应（antigen-antibody reaction）是抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。它既可发生在体内，也可发生在体外。 体外的抗原抗体反应表现为沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合、中和反应等反应现象。 4 沉淀反应 沉淀反应（precipitation）是可溶性抗原与相应抗体在电解质存在的条件下发生特异性结合所出现的沉淀现象。 5 6 单向扩散试验 这是一种定量试验，一般是用已知的抗体测未知的抗原。由于抗体已于凝胶混合，不会在扩散，仅抗原从小孔向四周扩散，因此称为单向琼脂扩散试验。 7 单向琼脂扩散试验的基本过程 8 单向琼脂扩散试验的结果 9 抗原含量与沉淀环直径的关系Mancini曲线 10 抗原含量与沉淀环直径的关系Fahey曲线 11 双向琼脂扩散试验 在琼脂内抗原和抗体在凝胶中不同孔内各自向四周扩散，彼此在相遇处特异性结合，形成白色沉淀线，称为双向琼脂扩散 12 双扩散实验结果 13 免疫电泳技术 免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）是可溶性抗原和抗体在直流电场的作用下，在凝胶内加速定向运动，彼此相遇结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。 14 免疫电泳技术包括以下几种具体方法 对流免疫电泳 火箭免疫电泳 免疫电泳 免疫固定电泳 15 对流免疫电泳结果 对流免疫电泳是将双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。 16 火箭电泳示意图 火箭免疫电泳是将单向免疫扩散与电泳相结合的一项定量检测技术 17 免疫电泳基本过程 18 免疫电泳结果 19 免疫固定电泳 免疫固定电泳是区带电泳与沉淀反应相结合的技术。首先将样本进行区带电泳，然后将浸有抗体的滤纸贴于其上，让抗原抗体发生沉淀反应，洗脱游离的抗体，形成的沉淀保留在凝胶中 20 免疫固定电泳（IgAκ型） 21 免疫浊度测定 免疫浊度测定（immunoturbidimetry）是将现代光学测量仪器与自动分析检测系统相结合应用于沉淀反应。抗原抗体在液相中特异性结合形成免疫复合物，复合物微粒对光线的干扰可用仪器检测出来，并对抗溶性抗原定量测定。 22 根据其原理可以分为 透射免疫比浊（turbidimetry）、 散射比浊（nephelometry） 速率散射比浊（rate nephelometry）。 23 透射免疫比浊试验 投射免疫比浊法是在180°角，即在直射角度上测定光透射强度。 24 散射免疫比浊试验 在光路的5°～96°角的方向上测量散射光强度和被测溶液中微粒浓度关系的方法称散射比浊测定法。 25 凝集反应 细菌和红细胞等颗粒性抗原，与相应抗体在电解质存在的条件下，特异性结合，出现肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应 26 直接凝集反应 直接凝集反应是颗粒性抗原在电解质参与下直接与相应抗体结合，出现凝集。反应中的抗原可以称为凝集原（agglutinogen），参与反应的抗体称为凝集素（agglutinin）。 27 间接凝集试验 间接凝集反应是将可溶性抗原（或抗体）吸附在一种与免疫无关的惰性颗粒表面，使其成为致敏载体，在与相应的抗体或抗原反应，在电解质存在的条件下，载体颗粒被动地发生凝集。 28 （正向）间接凝集试验 29 反向间接凝集试验 30 间接凝集抑制试验 31 自身红细胞凝集试验 32 抗球蛋白试验 抗球蛋白试验是1945年由Coombs建立的一种抗球蛋白抗体参与的血凝试验，用于检测抗红细胞不完全抗体，因此又称为Coombs试验 33 直接Coombs试验 34 间接Coombs试验 35 补体介导的溶解技术 血清补体总活性测定（CH50试验）