动物实验的最基本技术和方法.pptVIP

动物实验的基本技术和方法 上海中医药大学实验动物中心 汤家铭 进行实验操作前必须注意的事 1.动物福利和动物实验伦理问题 饲养繁殖实验动物的目的是用实验动物作为人类的替难者进行各种生物医学研究。一方面随着生物医学的发展，实验动物的使用量逐年增加，使用种类也逐年扩大；另一方面从动物福利和动物实验伦理学考虑，又需要减少一些不必要的动物实验，特别是人类的宠物诸如猫、犬、猴等，或者在不得不做的动物实验中尽可能将动物的痛苦、压迫和不适降到最低。 国际上对动物实验伦理有如下五项要求: ⑴动物居住空间应符合标准,注意日常的饲育管理,不使动物陷入饥饿、缺水和患病。 ⑵尽可能地采用代替法最少地使用和牺牲动物。 ⑶在必须使用犬、猫和猴时，在实验前应进行训练，尽可能地减少动物的恐惧和不安。 ⑷实验结束和动物不可能恢复时，应采取安乐死。 ⑸要爱护动物和对由于实验死亡的动物应持有怜悯和感谢之情。 2. 动物实验技术和方法是实践性非常强的，不能仅靠书本理论知识，需要通过反复实践加以掌握。 目的： 保证实验的顺利进行。 减少动物承受的痛苦。 动物实验前的准备 1. 所用动物实验设施是否符合本实验要求 普通设施，SPF设施，感染性设施，有毒有害供试品设施，放射性设施 实验室、手术室 2. 所用实验动物的品种、品系、性别、数量等能否得到 所需要的动物实验技术是否熟练掌握 所用动物实验器具、试剂是否准备好 5.预实验 正式实验前的演习 预实验可用少量动物进行 预实验结果不能并入正式实验结果一起分析。 一、动物的抓取 动物的抓取是顺利进行各项动物实验操作最基本的一个环节。 应熟练掌握各种实验动物的抓取方法，用轻柔的手法把对动物施加的恐惧和痛苦降到最低。 一般说来动物是不会主动攻击人的。 小鼠抓取的注意点 大鼠抓取的注意点 3. 豚鼠抓取的注意点 4. 兔抓取的注意点 最好戴人造革围裙和袖套，以免爪子抓伤。 采用正确地抓取方法。 可采用兔固定器固定进行实验操作，或一人抓取固定，一人实验操作。 二、动物编号常用的标记方法 适用需要个体识别的实验 染料标记法：适合白色被毛的动物，如小鼠、大鼠、豚鼠、兔等。 黄色：常用3~5%苦味酸溶液 红色：常用0.5%中性红溶液 咖啡色: 2%硝酸银溶液 黑色：煤焦油酒精溶液 优点：简单、易识别 缺点：长期易退色；不能编大号码。 2. 剪耳（打孔）法：啮齿类小动物 3. 号码钳法：适用于兔、犬等大动物 4. 耳牌法：适用于羊、牛等大家畜 5. 电子芯片植入法： 三、动物被毛的去除方法 1. 剪毛法：用弯头剪逆毛方向剪 适用于各种实验动物 2. 拔毛法：常用于兔的耳缘静脉注射 3. 剃毛法：剃须刀、手术刀 适用于大动物 4. 脱毛法：脱毛剂 常用脱毛剂配方 配方1：硫化钠8g溶于100mL水中。 配方2：硫化钠：肥皂粉：淀粉的比例为3：1：7，再加水调成糊状。 配方3：硫化钠10g和生石灰15g溶于100mL水中。 配方1和2适用于家兔和啮齿类动物的脱毛，配方3适合给犬脱毛。 脱毛后用清水将脱毛区清洗干净。 四、实验动物的麻醉方法 对实验动物进行麻醉的目的是，消除实验过程中引起的痛苦和不适，确保实验动物的安全和动物实验的顺利进行，是动物实验伦理的一个重要方面。 应结合实验目的、实验动物种类、日龄及健康状况等因素进行综合考虑，决定选用的麻醉剂和麻醉方法。 麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉两种。在实验动物的麻醉中绝大多数采用全身麻醉。 全身麻醉简称全麻，全麻是指麻醉药通过呼吸道吸入、静脉和肌肉注射等途径，进入实验动物体内，使其产生短时间意识丧失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制现象。当麻醉药从体内排出或在体内代谢破坏后，实验动物逐渐清醒，不留后遗症。 全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途径，吸入麻醉法用挥发性麻醉药，注射麻醉法用非挥发性麻醉药。 （1）吸入麻醉法 常用药物为乙醚等。吸入麻醉法有开放吸入和气管内插管吸入两种方法。动物实验大都采用开放吸入法 开放吸入：适用于啮齿类小动物，可用乙醚、氯仿 小动物吸入麻醉机国外已研制成功。 气管内插管：适用于犬、猴、羊等大动物，乙醚是最常用的麻醉药。 吸入麻醉的优点： 麻醉平稳、安全可靠、 停止吸入后很快苏醒 缺点： 需要一定的仪器设备， 吸入乙醚全麻的分期 第一期：镇痛期 指麻醉给药开始到实验动物意识完全丧失的时期。此期实验动物各种反射存在，肌张力正常，血压升高，心跳加快。 第二期：兴奋期