选修3 基因工程 基本工具.ppt

专题1 基因工程 这就是定向改造生物的新技术 ——基因工程 基因工程：又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 为什么能把一种生物的基因“嫁接”到另一种生物上并成功表达？ 1、大多数生物的遗传物质都是DNA，且主要为双螺旋结构，即不同生物的DNA分子基本结构是相同的，都遵循碱基互补配对原则 。所以不同的生物DNA可以嫁接 2、地球上的所有生物共用一套遗传密码，所以，一种生物的基因可以在另外一种生物体内得以表达 1.1 DNA重组技术的基本工具 1.1 DNA重组技术的基本工具 准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性内切酶 DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶 基因转移工具（“分子运输车”） ——基因进入受体细胞的载体 限制性内切酶 1.特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，在特定的切点切割。 2.分布：主要在微生物中。 3.结果：产生黏性末端（碱基互补配对）、平末端。 4.举例：大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端，SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在 C 和G之间切割形成平末端 。 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 　　 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。 （一）作用： 在进行基因工程的操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 重组DNA分子的模拟操作 * 现代生物科技专题 原理： 操作水平： 结 果： 基因重组（不同种生物之间的基因组合） DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人 类所需要的品种。 　　基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具： “分子手术刀”——限制性核酸内切酶（简称限制酶） 1.1 DNA重组技术的基本工具 来源：主要是从原核生物 中分离纯化出来的。 思考： 这类酶存在于原核生物中有什么作用呢？ 切割外源DNA，使之失效，达到保护自身的目的。 一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（简称限制酶） 1.1 DNA重组技术的基本工具 限制酶能够识别双链DNA分子上的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 2、作用特点 ： 1、来源：主要是从原核生物 中分离纯化出来的。 A A T T 磷酸二酯键 T A A T 氢键 G C C G 限制酶 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在鸟嘌呤脱氧核苷酸和腺嘌呤脱氧核苷酸之间切开。 “分子手术刀”——限制性核酸内切酶 （二）基因操作的工具 限制酶 什么叫黏性末端？ （二）基因操作的工具 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 在中轴线两侧 什么叫平末端？ SmaI 识别CCCGGG序列并在G和C之间切割 当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的则是平末端。 C C C G G G C C C G G G C C C G G G G G G C C C 中轴线 平末端 GAATTCCGTAGAATTCGGATT 尝试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端 CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 GAATTCCGTAGAATTCGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 思考: 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。 CTTAA G GCCTAA AATTCGGAT 　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 思考: 是，会产生相同的黏性末端。 　　DNA被限制酶切断后有两个反向互补的“黏性末端