生物样品的常用分析基本方法.pptVIP

底物标记荧光免疫分析(FPLA) 用一种本身不能发出荧光的酶底物来标记药物，当酶底物受到相应酶作用时，能裂解产生荧光，其荧光强度与待测药物含量成正比。 荧光偏振免疫分析( FPIA) 用一定波长的激发偏振光照射荧光物质，然后利用物质吸收光能后所发射出的偏振荧光强度来测定样品中待测组分含量的一种分析方法。 荧光偏振免疫分析( FPIA) 荧光偏振免疫测定方法评价： 样品用量少 荧光素标记试剂稳定，使用寿命长 重复性好 快速，易自动化 适于小、中等分子物质检测 荧光偏振免疫测定方法评价 灵敏度较非均相荧光免疫测定法低 一.比色法（COL） 属于吸收光度法 定量依据---Lambert-Beer定律 A=ECL 物质在一定波长处的吸收度与其浓度成正比。比色法仅用于少数药物浓度高，干扰成分少的生物样品的测定。 主要用于药物监测和人群代谢分型的测定，逐渐被现代色谱分析方法所取代。 紫外分光光度法（UV） 原理同比色法。适用于测定具有紫外吸收的药物。 体内药分中母体药物与代谢物的紫外吸收光谱非常相似，易产生干扰。受灵敏度和选择性的限制，其在体内药分中的应用也呈下降趋势。 荧光分析法（Fluorescence method） 利用物质经光照射后能发射荧光的特性进行分析的光学分析法。 优点： 1.灵敏度高。检出限可达10-10 g/ml~10-12g/ml。 2.选择性好。 荧光分析法（Fluorescence method） 1.直接测定法 适于自身能产生荧光的物质，因荧光性质与溶液的pH有关，故荧光强度的测定须在适宜的pH介质中进行。 (一)常规荧光分析法 2.间接测定法 将无荧光或弱荧光物质衍生化，测定衍生物荧光强度的方法。 荧光分析法（Fluorescence method） 利用胶束溶液对荧光物质的增溶、增敏和增稳作用，大大提高荧光分析法的灵敏度和稳定性。 （二）胶束增溶增敏荧光分析法 用β-CD单分子胶束荧光技术检测秦艽中龙胆苦苷血药浓度。 龙胆苦苷嵌入β-CD的疏水空洞中，使其在胶束中溶解度增加和相互碰撞几率减少，荧光量子效率提高，从而提高检测灵敏度。 荧光分析法（Fluorescence method） （三）荧光探针分析法 使用荧光探针从无荧光的药物制备有荧光的衍生物。 优点 1 增强待分析物质的荧光响应，提高检测灵敏度和选择性。 2 稳定分析物，尤其针对活泼的和有挥发性的化合物。 3 有助于化合物基团的确证。 局限 衍生化增加分析步骤，易引入分析误差。 荧光分析法（Fluorescence method） 示例 Tb-吡哌酸的荧光体系及尿和血清中吡哌酸含量的测定 应用镧系离子发光探针生成Tb-吡哌酸配合物，在紫外光照射下发生分子内能量传递使Tb产生特征荧光，其荧光强度与吡哌酸浓度呈线性关系，从而建立一种灵敏、快速的分析吡哌酸的方法。 4 荧光分析法（Fluorescence method） （四）荧光淬灭分析法 待分析的物质能使某种荧光化合物的荧光淬灭，通过测量荧光化合物荧光的下降，间接测量该分析物质。 原子吸收分光光度法（AAS） 原子吸收分光光度法是基于蒸汽相中被测元素的基态原子对其原子共振辐射的吸收来测定样品中该元素含量的一种方法。 原子吸收分光光度法在测定体液中微量金属元素方面占有特殊的地位。 原子吸收分光光度法（AAS） 优点： 灵敏度高，精密度好，选择性好，应用范围广，试样用量少，简便快速，易于自动化。 局限性： 1.该法只能进行无机元素的含量分析，不能直接用于有机化合物的含量分析和结构分析； 2.每测一种元素要更换一次空心阴极灯，不能同时进行元素分析； 3.标准工作曲线的线性范围窄，一般为一个数量级。 原子吸收分光光度法（AAS） 原子吸收分光光度计主要部件： 光源（空心阴极灯） 原子化器 单色器 检测系统 原子吸收分光光度法（AAS） a b 吸收光谱仪 光源 单色器 样品 检测器 读出器件 原子化器 单色器 光电倍增管 样品 空心阴极灯 读出器件 原子吸收分光光度法（AAS） 直接测定法 石墨炉原子吸收法测定大鼠血清、尿、胆汁和组织中的顺铂 间接测定法 尿样中氨基多糖含量的测定 免疫分析法 放射免疫分析法 (radioimmunoassay) 原理:放射性标记抗原和未标记抗原（待测物）与不足量的特异