第2章节 菌种的来源、生物活性物质的筛选和菌种保藏.pptVIP

第二章 生产菌种来源、生物活性物质的筛选和菌种保藏;发酵工业生产水平 的三个决定要素: ;第一节 菌种来源;一、微生物是生物活性物质的丰富资源 微生物资源丰富，广布于土壤、水和空气等自然界中，种类之多至今仍是一个难以估计的未知数。它们除了能生活在动、植物可以生长的环境中外，还可以生活在动、植物不能生长的环境中，为适应环境对它们生存造成的压力，它们进化出许多特殊的生理活性物质。所以微生物过去、现在以及将来都是人类获得生物活性物质的丰富资金源。 1、微生物工业上常用菌种：细菌、放线菌、真菌（酵母菌、霉菌）;常用的细菌;枯草芽孢杆菌 应用：生产淀粉酶;放线菌;酵母菌;霉菌;应用：酱油、酱类（淀粉酶）;米曲霉 应用：产糖化酶和蛋白酶、主要用于酿酒制曲和酱油制曲; 毛 霉 应用：可以产生蛋白酶，我国多用于豆腐乳、豆豉等的制作;根霉 种类：米根霉、华根霉、少根根霉、爪哇根霉 应用：酿酒;青霉菌;菌株分离（isolation)就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性，采取迅速、准确、有效的方法对它们进行分离、筛选，进而得到所需微生物的过程。; 发酵工业上使用的微生物菌种，最初都是从自然界中分离筛选出来的。;★ 培养分离中要解决的问题; 调查研究（包括资料查阅）;第三次平板分离;二、含微生物样品的采集; 第二节 菌种的分离;一、施加选择性压力分离法 ;? 其要领是提供一些有利于所需菌株生长或不利于其他菌型生长的条件，例如，供给特殊的基质或加入某些抑制剂。;2、利用固体平板的生化反应进行分离 （方法之一）;1）、透明圈法;2）、变色圈法;;;3）、生长圈法;4）、抑菌圈法;;3、放线菌的分离;2）、用于分离放线菌的预处理技术 干热处理：土壤在120℃或100 ℃干热处理能够极大地减少分离平板上的丝状细菌和链霉菌。 杀菌剂苯酚（1.5%）、葡萄糖酸洗必泰（CG0.01%)和苄索氯铵（BC 0.01%):不同的放线菌孢子对杀菌剂的抗性不同。链霉菌的孢子和杆菌及假单孢菌的营养细胞用苯酚、CG和BC有30 ℃处理30min即被杀死；相反的，小双孢菌属的孢子对各种杀菌剂都有相当强的抗性。;3）、抑制剂的选择 在放线菌分离琼脂中通常都加入重铬酸钾或放线菌酮，以抑制真菌、细菌的繁殖。 4）、放线菌分离方法研究的发展趋势 一是：深入研究稀有放线菌的生态分布、生理特性及其他特殊性质，以设计出适合不同类群菌株的分离方法。 二是：向特殊的生态环境发展，如海洋等极端环境，从中分离极端类群以获得新的物种资源。;4、自然界中细菌的分离;1）．土样采集方法;2）．植物体采集方法; 3）．水样采集方法;4）、生态学参数及培养基的组成原则;C、所有分离培养基中都应含有抗真菌剂(如放线菌酮和制霉素)，掺加浓度一般为50~100μg／m1， 以抑制真菌的生长。 D、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l~2天。 E、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应调节到与试样的生态系统参数值相近。 ;5、真菌分离;4)、选择性富集：是通过一定的方式使样本中一种或一群微生物数量上的增加而利于分离的一种技术。 富集可以是种水平的，如通过营养要求的改变来富集分离镰刀菌；也可以是组成群水平的，如以纤维素为唯一碳源的选择性培养基可选择性富集所有能降解纤维素的纤维素裂解微生物。 5)、选择性抑制培养基可使非目标微生物消除或减少到一定程度。在分离培养基中加入一定的抗生素即可有效地抑制细菌生长及菌落形成。;真菌的分离方法;二、 生物活性物质的筛选;1、靶标的确定;高通量筛选（high throughput screening):将许多模型固定在各自不同的载体上，用机器人加样，培养后用计算机记录结果，并进行分析，使筛选从繁重的劳动中解脱出来，实现大规模筛选。 细胞模型：观察待测样品对细胞的作用，只能反映药物对细胞生长等过程的综合作用，不能反映作用的途径和靶点。包括各种正常细胞和病理细胞。 分子模型：包括受体、酶，其特点是药物作用的靶点明确。 通过高通量筛选方法，可以发现效果好、临床应用价值高的创新药物，治疗疑难病症。;1）、抗肿瘤活性化合物的筛选;3）、抗病毒活性药物的筛选;3、筛选方法;1）配基结合分析;2）酶法分析;3) 基于报告基因的分析;作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件： 　 　(1)已被克隆和全序列已测定； 　(2)表达产物在受体细胞中本不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物； 　(3)其表达产物能进行定量测定，无毒。 ;最早人们通常使用类