微生物遗传学5单元.pptVIP

1. PCR技术 现代基因操作技术 现代基因操作技术 2. DNA Shuffling技术 基本原理：先将来源不同但功能相同的一组同源基因，用DNA核酸酶I进行消化产生随机小片段，由这些小片段组成一个文库，使之互为引物和模板，进行PCR扩增，当一个基因拷贝片段作为另一基因拷贝引物时，引起模板转换，重组因而发生，导入体内后，选择正突变体作为新一轮的体外重组。一般通过2~3个循环，得到产物大幅度提高的重组突变体。 全基因组改组：将DNA shuffling的多亲本体外重组的优点和传统的育种(细胞融合)相结合的全基因组体内改组技术。 四、原生质体融合（protoplast fusion） 1.定义：通过人为的方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生 质体进行融合，以获得兼有双亲遗传性状的稳定重组 子的过程。 融合子（fusant） 意义： 打破了微生物的种界界限，可实现远缘菌株的基因重组。 可使遗传物质传递更为完整、获得更多基因重组的机会。 可与其他育种方法相结合，如把常规诱变和原生质体诱变所获得 的优良性状，组合到一个单株中。 两亲本菌株的选择和遗传标记的制作（选择不同的营养缺陷型， （A: [a+b-], B:[a-b+]） 对药物抗性差异） 原生质体的制备（高渗条件） 原生质体再生（测定再生率） 融合（PEG、离心沉淀、电脉冲等） 融合子的检出（直接检出法和间接检出法） 实用性菌株的筛选 2. 操作过程： 五、微生物的基因组结构 1.基因组（genome）： 指存在于细胞或病毒中的一整套遗传信息。 （一个物种的单倍体的所有染色体及其所包含的遗传信息的总称） 原核生物，多为单倍体（在一般情况下只有一条染色体） 真核微生物，通常为双倍体（多条染色体，啤酒酵母有16条染色体。） 2.微生物与人类基因组计划 人类基因组计划 （Human Genome Project） 1985年提出； 1990年正式开始实施； 2001年2月，测序工作完成 后基因组时代 （ Postgenome Era ） 微生物基因组测序工作是在人类基因组计划的促进下开始的，最开始是作为模式生物，后来不断发展，已成为研究微生物学的最有力的手段。 被选择进行全基因组测序的微生物： （1）人类基因组计划中的模式生物重要性 a）技术上从低等入手，建立技术、积累经验。 通过对基因组结构相对简单生物，特别是微生物基因组的测序，对大规模测序的策略及技术进行检验，积累经验； b）理论上利用基因组在进化上的连续性进行比较研究 通过对不同进化程度的基因组的分析、比较揭示更多的基本生物学信息。通过研究较为简单的基因组而解答复杂的人类基因组问题， 被选择进行全基因组测序的微生物： （2）与人类生活关系密切的微生物 （1）人类基因组计划中的模式生物重要性 医疗健康: 重要的致病菌 工业生产: 工业生产菌 农业种植: 植物病原菌 （3）对阐明生物学基本问题有价值的微生物 一些古生菌：如Methanococcus jannaschii (詹氏甲烷球菌)等，它们是微生物世界多样性的代表，它们的序列比较有助于找出其进化关系。 3.微生物基因组结构的特点 3.1 原核生物（细菌、古生菌）基因组 （1）染色体为双链环状的DNA分子（单倍体）； 链环状的染色体在细胞中以紧密缠绕成的较致密的不规则小体形式 存在于细胞中，该小体称为拟核(nucliod)，其上结合有类组蛋白蛋 白质和少量RNA分子，使其压缩成一种手脚架形的致密结构。 例外：布氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)的染色体是线状的 3.1 原核生物（细菌、古生菌）基因组