Wnt信号传导通路的抑制剂接触抑制，粘附.pptVIP

基因/细胞治疗策略：利用成熟干细胞的天然能力修复受损组织 Darwin J. Prockop, M.D., Ph.D., Director, Center for Gene Therapy, Tulane University Health Sciences Center, New Orleans, LA 翻译者：violet39 (DXY) 机体是如何进行自身修复的？ Cohnheim (1867) 年提出：可能是通过来自于血液中的细胞进行自身修复的。 最近的一些假设认为：可能最先是从许多组织中发现的干细胞样细胞开始的。然后这些细胞可能被骨髓中的干细胞耗尽。 修复系统是如何较好的工作的？ 我们并不在进化树的最高处： 水蛭、涡虫等可以从很少的细胞复原完整的器官； 蜥蜴和类似的动物可以恢复断肢或断掉的尾巴； 大鼠和小鼠的大部分器官都不易发生永久性的伤害。 基因/细胞治疗策略 利用骨髓中的干细胞样细胞使人类具有和啮齿类动物或者蜥蜴一样的修复能力； 我们的方法是扩增患者自身细胞； 问题 1、骨髓中确实含有非造血器官干细胞吗？ 2、如果有，是什么细胞呢？ 3、如果有，这些细胞是如何修复组织的呢？ 问题 1、骨髓中确实含有非造血器官干细胞吗？ 已从下列实验得出一些结论性数据 a、观察细胞培养时的分化性； b、动物实验； c、骨髓移植和器官移植的患者。 （参见 Prockop et al. PNAS 100(1): 11917-23, 2003） 骨髓中的一个候补的修补细胞 分离： ——将骨髓放置在塑料表面中； 该种细胞有许多名字： ——“骨髓间质细胞”，由于它常被用作HSCs的供给层 ——“间质干细胞”，由于它能分化成多种细胞类型 两者折衷，这种细胞被称做：“MSCs” Friedenstein，1976，指出粘附细胞(MSCs)具有下述特点： ——有核细胞所占比例为：1:10,000到100,000； ——能快速增殖； ——在体内或体外可分化成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞； 呼吁将MSCs用于治疗 1、相对容易： ——分离和扩增， ——由同一个患者获得； 2、具有多向分化的潜能； 3、不会形成肿瘤； 4、倾向于定向于损伤组织和修复组织。 MSCs的扩增 由2ml骨髓开始扩增 ——可得到5亿个以上的 MSCs； ——需要2周的时间； 扩增密度效应 放射自显影观察培养基状态 胰蛋白酶酶解16小时，SELDI TOF 重组Dkk-1缩短MSCs培养过程中的延滞期（重复实验） Dkk-1抗体——延长延滞期 Wnt抑制剂，Dkk-1在快速扩增的hMSCs细胞中表达 MSCs培养过程中特殊的增殖动力学 a、细胞在低密度培养时维持在延滞期，直到大量合成Wnt信号传导通路抑制剂Dkk-1。 b、当Dkk-1的合成停止，细胞表达Wnt促进信号转导通路的配体Wnt-5α时，细胞进入稳定期； c、当把细胞再次传代，这个过程会重复进行，直到传4-6代，细胞进入衰亡阶段为止。 Dickkopf-1(Dkk-1) Wnt信号传导通路抑制因子 ； 在大多数系统中抑制Wnt信号传导，使细胞增殖停止； 一个可能性：用于MSCs培养 另一个可能性：Dkk-1可用于扩增病人自身MSC细胞的疾病治疗中。 随培养状态变化的MSCs系统 问题：MSCs细胞能用于临床试验吗？ 2ml骨髓能否在2周内扩增到5亿个以上的细胞； 培养条件很苛刻； 在这个领域中，易变性是一个严重的问题 ——NIH花费430万美元资助tulane中心，使其为其它的研究者提供标准化的标本。 问题 1、骨髓组织确实含有非造血组织干细胞吗？ 2、如果有，那么是什么细胞？ 3、如果有，这些细胞又是怎样修复组织的呢？ 疾病的靶标是什么？ 在一些特殊的的情况下： ——诊断疾病比较困难； ——心脏、肝脏、肾脏、代谢、中枢神经系统疾病。 我们的方法 由于毁坏所引起的疾病或者可预测下行过程的疾病； 没有有效的治疗方法以及从动物模型得到的合理的数据。 我们的研究对象：脊髓损伤 在美国，3000多人身患永久性麻痹，每年所花费的医疗费用有500,000美元。 没有有效的治疗方法。 四个实验室已经在大鼠模型上取得了有前途的结果。 一些医疗机构采用MSCs治疗的研究进入四期，没有观察到毒性反应。 脊髓损伤大鼠模型 MSCs改善 ——运动功能； ——轴突再生能力； ——通过骨髓中的造血干细胞提供再生环境。 (Hoffstetter et al. PNAS 2002) 成年大鼠挤压损伤 1周后将大鼠MSCs细胞注入脊髓