液相色谱柱的使用和维护-安谱试验.PDF

上海安谱科学仪器有限公司 Tel：021 Shanghai ANPEL Scientific Instrument Co., Ltd. Fax ：021 液相色谱柱的使用和维护 一、色谱柱的管理 制定色谱柱管理的标准操作规程并严格执行。每一根新购进的色谱柱必须造册登记, 内 容包括:生产公司、品名、型号、规格、购进时间、启用时间、单价、柱内保护溶液等。色 谱柱分类存放,硅胶柱、化学键合硅胶柱、氰基或氨基柱、离子交换树脂柱、凝胶柱各用一 个色谱柱盒,盒上贴上标签,注明类别。随柱说明书装入密实袋附在登记本上。每启用一根色 谱柱,在色谱柱上贴上标签,注明启用日期。每根柱子每两个月保养一次,特别是对于一些使用 频率少的柱子,因为放置时间长,容易干柱,每一次做好保养记录。对于确已失效的柱子,做好停 用记录,不能随意丢弃,专门存放,如果现用的柱子的填料需要填补,可以用存放的柱子的填料。 在从事生产的单位的质检部门,对于使用时间较长柱效降低的柱子,可把它用于检测产品的中 间体。 二、液相色谱柱的使用 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变 化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件 是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的样 品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。 1. 样品前处理 a、最好使用流动相溶解样品。 b 、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不 可逆吸附的杂质。 c、使用0.45µm 的过滤膜过滤除去微粒杂质。 2. 流动相的配置 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流 动相具备以下的特点： a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在 柱中)。 b、流动相与样品不产生化学反应 c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可 运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。 d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用 UV 检测器，最好使用对紫外 吸收较低的溶剂配制。 e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。 f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测， 还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。 3、流动相流速的选择 因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特 定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为 4.6mm 的色谱柱，流速一 网站： - 1 - 上海安谱科学仪器有限公司 Tel：021 Shanghai ANPEL Scientific Instrument Co., Ltd. Fax ：021 般选择 1ml ／min，对于内径为4.0mm 柱，流速0.8ml ／min 为佳。 当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短 分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。 注意： a ．流动相要求使用0.45 µm 滤膜过滤，除去微粒杂质。 b ．使用HPLC 级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高 柱性能。 4. 流动相平衡： a、在进行样品检测前，至少使用20 倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定 要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。 b、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓 冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为 流动相冲洗C18 色谱柱，以免柱性能损坏（添加 5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达 到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡）。 c、流动相需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的